一、什么是內毒素

內毒素，英文名為Endotoxin，是革蘭氏陰性菌菌體中存在的毒性物質總稱，為多種革蘭氏陰性菌細胞壁上的結構。細菌內毒素主要由磷脂、脂蛋白和脂多糖（LPS）組成，其中脂多糖（LPS）是天然或實驗室制備的內毒素復合物的生物活性部分，發揮毒性作用的是類脂質A（Lipid A）。不同革蘭氏陰性菌的脂質A結構基本相似，所以由此類細菌引起的感染導致的毒性效應大致相同，主要表現為發熱、微循環障礙、內毒素休克及播散性血管內凝血等。當細菌死亡裂解或者自溶后，內毒素會被大量釋放出來。內毒素耐熱性和化學穩定性很強，所以一般的方法很難去除或滅活內毒素。

二、 為什么要檢測內毒素

環境中廣泛存在的格蘭氏陰性菌容易污染生產過程，其裂解后會釋放出內毒素，因內毒素耐熱性和化學穩定性強而難以滅活，所以一旦有內毒素污染進入血液，即使極少量也能引起發熱休克等嚴重反應，因而內毒素與其他已知熱原污染物相比，顯示更強的熱原性。所以內毒素被為應加以控制的物質，對用于人和動物的注射藥品如化學藥品、抗生素、放射性藥品、生物制品以及醫療器械如透析液、植入式器械等的原輔料、中間和放行產品均需要進行內毒素檢測，以確保制品的安全性。

三，內毒素檢測方法：根據反應原理，內毒素檢測方法可分為以下4種：凝膠法、濁度法、顯色法和重組C因子法。

鱟試劑檢查法：20世紀70年代，分為凝膠法、濁度法和顯色基質法。優點：易操作，靈敏度高，可用于內毒素定量檢測;缺點：鱟血批次間有差異；對革蘭氏陰性菌以外的內毒素不靈敏；易受β-葡聚糖（β-Glucans）影響而產生假陽性；鱟受到動物保護，無法大批量供應。

重組C因子法（rFc）：21世紀初，通過重組方法產生C因子。優點：C因子來源穩定，受批次影響小；操作簡單快速；更強的抗干擾能力（不受β-glucans影響）；專屬性好。缺點：來源于不同品種鱟血蛋白序列的重組蛋白對內毒素的反應性可能不同。

四、內毒素實驗過程中的常見問題和注意事項

Q1：用于內毒素實驗的耗材和試劑如何選擇？

A1：一般選擇內毒素試劑盒廠家配套的試劑和耗材，如需額外購買，一定要選擇除熱原的產品用于內毒素檢測實驗（除熱原指內毒素濃度小于 0.005 EU/mL）；另外也可采用超濾法、活性炭法、熱處理法、化學降解法、親和色譜法等。

Q2：如何選擇鱟試劑的靈敏度值？

A2：通常因為待測樣本中存在干擾因子，所以樣本通常需要進行處理或者稀釋。建議選擇靈敏度高的鱟試劑進行實驗。

問3：是否每一批注射用水檢查細菌內毒素時都需要加入陽性對照？

答3：是的

問4：細菌內毒素工作品用檢查用水稀釋后，實驗剩下的可以保存再利用嗎？

答4：稀釋的內毒素溶液靜置時間超過10分鐘，用前在旋渦混合器上劇烈振搖1分鐘，配置時間超過4小時的內毒素溶液應丟棄。

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