2023年Lonza Neclefector™技術面世22周年，成功應用于原代細胞、干細胞、神經元等難以轉染的細胞中，文獻引用量超過23,000+篇，成為基因治療、細胞治療、免疫治療研究中的一大助力。

隨著技術和產業的進一步發展，高通量核轉染的需求越來越高。Lonza推出的4D-Nucleofector™ 96孔模塊，每塊板最多可運行96個獨立程序，非常適合于中高通量的電轉實驗，具有快速、通量高、編輯效率優秀等特點，可廣泛應用于陣列cDNA、工業生產元件、RNAi以及CRISPR文庫篩選中，是優化電轉條件、藥物靶點發現以及疫病研究的高效工具。

應用案例分享

#1

文獻名稱：A platform for context-specific genetic engineering of recombinant protein production by CHO cells

應用方向：提高工業生產效率

發表期刊：Journal Of Biotechnology

發表時間：2020

研究內容：在蛋白質生產中，為了提高細胞系生產效率，往往需要針對目的蛋白（Target Protein）尋找到最合適的表達載體和培養條件。因此篩選表達載體過程中需要高通量方法（HT）高效的表達不同載體并測試其細胞性能（蛋白質生產效率及細胞生長能力），作者利用Lonza 96-well Shuttle™產品，在蛋白生產細胞系CHO中實現表達載體的高效篩選。

作者報道的實際測試數據：

A. Lonza 96-well Shuttle™產品轉染效率（Transfection Efficiency）平均高達90%，且針對不同遺傳載體轉染效率差異較小

C. Lonza 96-well Shuttle™產品在隨著加大電轉質粒DNA量(Mass of mAB Expressing Plasmid DNA)加大對細胞活力(Growth Rate)影響較小

D. Lonza 96-well Shuttle™產品在不同批次(Replicates)電轉中，批間差異小(Coefficient of Variation)

#2

文獻名稱：Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation

應用方向：針對免疫細胞進行DNA高效轉染及RNAi篩選

發表期刊：J Immunol Methods

發表時間：2010

研究內容：針對原代免疫細胞轉染，傳統電轉往往效率低下并且會導致原代免疫細胞活化及成熟，為后續原代免疫細胞研究以及工業生產造成影響。本文中，作者利用Lonza 96-well Shuttle™產品，構建針對原代樹突狀細胞（Primary Dendritic cells）高效轉染的平臺，針對難以轉染原代樹突狀細胞實現70%細胞活率及超50%的轉染效率。并利用該高效轉染平臺在原代樹突狀細胞中敲低RIG-I實現干擾素beta的下調表達。

作者報道的實際測試數據：

作者使用Lonza特異性轉染緩沖液在單核樹突狀細胞（MoDCs）測試不同程序下（Nucleoporation Program，X軸）轉染GFP的效率。可見利用Lonza 96-well Shuttle™高通量系統篩選出FF137/FF168具有接近60%的轉染效率，并且保持90%以上的未成熟單核樹突狀細胞狀態。

作者隨后測試了FF168程序在單核樹突狀細胞中siRNA轉染效率，RIG-I蛋白表達量在核轉染后顯著下調。

在全新升級的Lonza 4D-Nucleofector™ 96孔電轉模塊中，可直接與4D-Nucleofector™ 核心模塊連接使用，用于96孔格式的中通量核轉染。每塊板最多可運行96個獨立程序，非常適合于優化核轉染條件或作為中高通量篩選的有效工具。

應用

• 只需一塊板即可優化任何難以轉染的細胞
  

• 測試建立實驗的多個條件
  

• 篩選cDNA, RNAi或CRISPR、TCR文庫
  

• 適用于細菌轉化
  

優點

• 高效助力優化、篩選
  

每塊板最多可運行96個獨立程序，在5分鐘內自動處理

• 可拓展性
  

模塊化6×16 Nucleocuvette™板實現可拓展的通量

• 電轉條件可轉化性
  

可在不同4D-Nucleofector™模塊中，使用相同優化好的電轉條件，實現不同細胞量/通量的實驗需求

• 自動化兼容
  

無縫集成到自動化液體處理環境中

優化方案

4D-Nucleofector™ 96孔模塊可使用現有的96-well 電轉實驗方案或參考X-unit 20uL體系電轉實驗方案和導電聚合物96孔Nucleocuvette™板。

Lonza Knowledge Center中的Cell & Transfection Database中提供了特定細胞類型的優化方案或建議。在這些優化方案中，指出了經過內部測試的核轉染條件。此外，還會分享我們在處理特定細胞類型方面的經驗和知識，有效助力您的實驗。