雙特異性抗體

新型療法，方興未艾

雙特異性抗體（bsAbs）作為一種創(chuàng)新的治療方式，在制藥領(lǐng)域正迅速嶄露頭角。雖然單克隆抗體（mAbs）在過去幾十年里一直是生物制劑領(lǐng)域的主導(dǎo)力量，但bsAbs通過同時針對兩種不同的抗原，提供了一種全新的治療機制。這種能力開辟了新的治療途徑，尤其是在癌癥免疫治療和自身免疫性疾病等領(lǐng)域顯示出巨大潛力。

從2021年到2023年，雙特異性抗體的批準(zhǔn)數(shù)量顯著增加。在2021年之前，全球僅有三種bsAb獲得批準(zhǔn)。然而，從2021年到2023年，新增了11種bsAb療法，使得獲批的bsAb療法名單不斷擴充（參見圖1）。

圖1.過去幾年中，經(jīng)監(jiān)管機構(gòu)批準(zhǔn)并投放市場的bsAb數(shù)量大幅增加[1]。

然而，開發(fā)這些復(fù)雜分子帶來了挑戰(zhàn)，特別是在確保細胞株開發(fā) (CLD) 期間的質(zhì)量和產(chǎn)量方面。傳統(tǒng)的CLD工作流程通常會忽略測量關(guān)鍵的質(zhì)量屬性，例如正確的異二聚體濃度，或者直到克隆后數(shù)月才進行測量。最近的一項行業(yè)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，只有12%的CLD團隊在將克隆推進到攪拌培養(yǎng)階段之前評估產(chǎn)品質(zhì)量[2]。這種延遲的質(zhì)量評估增加了推進劣質(zhì)克隆的風(fēng)險，導(dǎo)致成本增加和資源浪費。

Beacon®平臺：CLD的游戲規(guī)則改變者

Beacon®平臺已成為應(yīng)對這些挑戰(zhàn)的先進集成解決方案。其核心技術(shù)利用光電定位 (OEP) 來操縱細胞和微珠，從而將單克隆精確地移動進入NanoPen®納升小室中進行實時分析。

這些NanoPen®小室是平臺的核心。每個小室在微尺度下運行，可容納不到兩納升的液體。如此小的體積創(chuàng)造了一個高度濃縮的環(huán)境，可以更快、更準(zhǔn)確地檢測分泌抗體，包括bsAbs。例如，傳統(tǒng)微孔板中需要數(shù)周時間的測量，在Beacon®系統(tǒng)上可以在幾小時到幾天內(nèi)完成。

此外，該平臺還可精確控制流體條件（例如pH、溫度和培養(yǎng)基成分），從而更接近生物反應(yīng)器環(huán)境。NanoPen®小室層流特性可確保擴散（而不是湍流混合）驅(qū)動分子的交換，從而實現(xiàn)高度可控且可靠的測定[3]。

Beacon®平臺測定雙特異性抗體

Beacon®平臺的主要優(yōu)勢之一是能夠高精度地篩選bsAbs。對于需要特定結(jié)合率（例如兩個不同結(jié)合域的比率為1:1）的雙特異性分子，盡早識別具有正確異二聚體濃度的克隆至關(guān)重要。使用Beacon®平臺，您可以測量擴散梯度 (DiGr) 信號，該參數(shù)與抗體產(chǎn)率直接相關(guān)。

與GSK和Incyte等者的合作證明了這種方法的有效性。在與GSK的一項研究中，使用 Beacon®平臺測量了13個不同的克隆，并與高效液相色譜 (HPLC) 分析進行了比較。結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)為0.99，證實了該平臺雙特異性測量的準(zhǔn)確性。

圖2. HPLC分析證實，使用雙特異性異二聚體測定法選擇的克隆分泌出預(yù)期的異二聚體百分比。克隆按顏色分為四個簇，代表不同純度的雙特異性異二聚體分子。A) 抗原測定的散點圖突出顯示了為 AMBR 發(fā)酵選擇的克隆的分布（三角形）。綠色虛線表示校準(zhǔn)后的Pen Score比率為1。B) 校準(zhǔn)后的Pen Score比率與發(fā)酵培養(yǎng)物測量的異二聚體百分比的散點圖。

同樣，在與Incyte的合作中，結(jié)果也反映了這些出色的預(yù)測結(jié)果。為了進一步了解這些功能，Incyte 的Shu Wang博士在最近的網(wǎng)絡(luò)研討會上分享了深入的分析，為bsAb測量提供了寶貴的觀點。

SpotLight試劑：簡化bsAb檢測

2023年，布魯克細胞分析事業(yè)部推出了SpotLight Human Lambda試劑，進一步簡化了Beacon®平臺上的bsAb測量。這一新增功能允許使用布魯克細胞分析公司提供的現(xiàn)成試劑對具有Kappa和Lambda輕鏈的抗體進行bsAb檢測[4]（圖3）。

圖 3. SpotLight Human Lambda拓寬SpotLight試劑列表，讓bsAbs的檢測更加方便。使用SpotLight Human Kappa和Lambda試劑的方法無需開發(fā)定制試劑來結(jié)合每條輕鏈，而是為具有兼容分子設(shè)計的 bsAbs測量提供了現(xiàn)成的解決方案。

通過使用SpotLight Human Kappa和SpotLight Human Lambda試劑，用戶可以進行比率分析以確定每個結(jié)合域的濃度。這種早期篩選可以在單細胞克隆后的幾天內(nèi)識別出產(chǎn)量最高的克隆，替代通常需要數(shù)周或數(shù)月的傳統(tǒng)工作流程。

結(jié)論

Beacon®平臺正在改變雙特異性抗體的開發(fā)。通過加快從轉(zhuǎn)染到最佳克隆鑒定的時間線，研究人員現(xiàn)在可以在過程早期測量異二聚體濃度等關(guān)鍵質(zhì)量屬性。此功能不僅降低了成本和開發(fā)時間，還提高了開發(fā)高質(zhì)量、高產(chǎn)克隆的可能性，使 Beacon®平臺成為不斷發(fā)展的雙特異性抗體治療領(lǐng)域工具。