在藥物研發和生命科學研究中，蛋白激酶作為細胞信號轉導的核心調控元件，在多種病理生理過程中扮演關鍵角色。據統計，人類基因組編碼的518種蛋白激酶中，約有30%與腫瘤、自身免疫病和代謝性疾病的發生發展密切相關。目前，全球激酶抑制劑市場規模已突破750億美元，并保持10%以上的年增長率，成為腫瘤和自身免疫疾病治療的核心領域。

激酶異常活化的病理機制

01信號轉導失調

正常生理狀態下，激酶通過精確的磷酸化調控維持細胞功能平衡。而在疾病狀態下，激酶活性異常（過度活化或抑制不足）會導致下游信號通路紊亂，驅動細胞增殖、炎癥反應或代謝異常等病理過程。

02多通路交叉調控

激酶網絡具有高度的復雜性和冗余性，常形成正反饋循環和代償機制。例如：

• MAPK通路異常與腫瘤發生發展

• JAK-STAT通路過度活化與自身免疫病

• PI3K-AKT-mTOR通路失調與代謝性疾病

典型激酶相關疾病及治療靶點

Revvity激酶研究解決方案

傳統激酶活性檢測方法（放射性檢測、ELISA等）存在操作繁瑣、通量受限等問題，而ADP-Glo方法需要自行尋找活性底物，且是間接檢測酶活。Revvity基于HTRF/LANCE均相檢測平臺，提供激酶研究解決方案，可為研究者提供高效、快速的激酶抑制劑篩選方法。

01Kinase活性檢測試劑盒

適用于功能性激酶抑制的篩選，通過直接檢測底物磷酸化水平的變化，定量分析化合物對激酶催化活性的抑制能力。

02Kinase結合檢測試劑盒

適用于激酶結合劑的篩選，通過競爭性結合實驗檢測化合物與激酶活性位點或變構位點的親和力。

Kinase檢測技術具有以下優勢：

• 高靈敏度：可檢測pM級激酶活性變化

• 生理相關性：保持天然構象的激酶-底物相互作用

• 高通量：適合大規模化合物篩選，檢測僅需2小時

• 高兼容性：試劑盒配備的通用型底物兼容200+激酶

HTRF技術原理與應用實例

KinEASE活性檢測試劑盒

檢測原理

KinEASE激酶活性檢測試劑盒基于均相時間分辨熒光共振能量轉移(HTRF)技術，采用通用型生物素化絲氨酸/蘇氨酸激酶（STK）或者酪氨酸（TK）底物與鏈霉親和素-XL665（SA-XL665）受體結合，當激酶催化底物磷酸化后，供體銪穴狀化合物（Eu3?-cryptate）標記的磷酸化特異性抗體可識別并結合磷酸化位點，形成"供體-底物-受體"三元復合物；在320/340nm激發光作用下，供體產生的620nm發射光通過能量轉移激發受體發出665nm特征信號，該信號由酶標儀檢測并定量分析激酶活性。

圖1. HTRF KinEASE活性檢測原理

操作流程

步驟1：反應啟動

將待測化合物（或對照緩沖液）與激酶、底物混合，加入ATP啟動磷酸化反應。

步驟2：檢測體系構建

反應孵育適當時間后，加入銪（Eu）標記的磷酸化抗體及SA-XL665受體，形成檢測復合物。

步驟3：信號檢測

繼續孵育1小時后，使用酶標儀讀取信號（激發波長320/340 nm，檢測發射波長620 nm和665 nm）。

圖2. HTRF KinEASE 活性檢測步驟

驗證數據

HTRF KinEASE試劑盒已完成200余種絲氨酸/蘇氨酸激酶及酪氨酸激酶的活性檢測驗證。同時，我們也提供LANCE® Ultra激酶檢測平臺作為選擇

酶濃度梯度滴定曲線與時間動力學特征

廣譜抑制劑星形孢菌素（Staurosporine）劑量依賴性抑制效應

激酶結合檢測試劑盒

檢測原理

Revvity KinEASE結合檢測試劑盒采用HTRF競爭法檢測原理，通過Eu3?-cryptate標記的GST/6His/生物素抗體捕獲相應標記的激酶，當激酶與熒光標記的ATP競爭性抑制劑示蹤劑（Staurosporine、Dasatinib或Sunitinib）結合時，HTRF信號比（665nm/620nm）隨示蹤劑結合增加而升高；待測化合物通過競爭性結合激酶ATP位點取代熒光示蹤劑，導致FRET信號減弱，從而實現對激酶抑制劑的快速篩選和親和力評估。

圖3. HTRF Kinase Binding檢測原理

操作流程

步驟1：復合物形成

將Eu3?-cryptate標記的抗體（抗GST/6His/生物素）與標簽激酶孵育，使其特異性結合；同時加入熒光示蹤劑（Staurosporine/Dasatinib/Sunitinib-XL665）和待測化合物，兩者競爭性結合激酶的結合位點

步驟2：信號檢測

繼續孵育1小時后，使用酶標儀讀取信號（激發波長320/340 nm，檢測發射波長620 nm和665 nm）。

圖4. HTRF Kinase Binding檢測步驟

驗證數據

d2熒光受體標記的紅色示蹤劑示蹤劑滴定曲線

幾種激酶結合劑的劑量依賴性抑制曲線

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