細胞接收后的操作流程與注意事項

1. 細胞收到后建議在培養箱穩定4小時左右再依據細胞密度，換液培養或傳代。

2. 如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞及時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶中繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基，培養2-3天。若3天后細胞都沒有出現增殖而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室，技術人員會跟進解決。

3. 貼壁細胞生長緩慢：適當提高血清濃度（高不超過20%），或可根據該細胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉移到新的培養瓶繼續培養。

4. 生長不均：貼壁細胞若出現生長不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重新打散細胞，加入新鮮培養基進行培養。

 

細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵守無菌操作）

1. 吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化時間，通常控制在1~2min）。

2. 鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁運動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落、吹散。

3. 取出部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，于培養箱中培養。

4. 注意培養基PH值變化情況，定期換液，待細胞密度達到70-80%時重復傳代操作或者凍存。