上海撫生ELISA流程的說明

   上海撫生物科技有限公司是一家專注于生物的技術企業，主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑的、銷售。并代理銷售，致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供的科研試劑和完善的技術服務，滿足生物化學、分子生物學 、細胞生物學、免疫學 ELISA試劑盒等生物科技實驗需求。目前很多客戶因為對品牌的信任度問題，公司仍然是一個非常好的選擇上海撫生ELISA試劑盒，是 你不二的選擇。

剩余的試劑盒材料要妥善保存

標準品分裝后按說明書要求的溫度保存，這樣可以避免污染，對要求冷凍保存的標準品還可以避免反復凍融；酶標板放回錫箔紙袋，加入干燥劑，封緊封口，4℃保存。忌未將酶標板*平衡至室溫，就放回錫箔紙袋，因為此時由于溫度差，酶標板上會有水汽，不利于穩定保存。

加樣要快速準確，避免氣泡

加樣時間宜控制在 15 分鐘內。加樣前要將樣本混勻，特別是凍存后融化的樣本（自然融化的血清等樣本會有分層現象），應上下顛倒充分混勻，注意動作輕緩，避免產生氣泡。如凍存融化后的樣本有沉淀，可以再次離心。整個加樣過程都要注意避免產生氣泡。氣泡會影響蛋白的相互結合，而影響反應進行。

孵育時要保證溫度均勻，防止揮發變干

孵育時壓緊封口膜。多塊板一起實驗時，要平放各板，不要疊放，以免因溫度不均造成漂移或邊緣效應。

洗板機的應用

使用洗板機，不但可以降低勞動強度，而且有利于保證 ELISA 測試的穩定性。目前的全自動洗板機不但具有很多實用的洗滌動作，如底部沖洗，兩點吸液，震動，交叉吸液；還可以根據需要調節沖洗壓力，沖洗距離，沖洗時間等參數。通過優選這些動作和參數，能保證良好的洗滌效果。洗板機的性能對于結果準確性影響也很大，好的洗板機要保證洗板后的殘留液盡可能的少，一般不超過 2μL，以洗滌后用人工拍板墊紙不濕為準。應定期檢查抽吸針頭是否堵塞。洗液如果含有吐溫，應隨用隨配。

手動洗板的操作指南

加洗液要快速，沒有多道移液器可以使用洗瓶。洗液應新鮮配制，以免被其他試劑污染，或染菌。加好洗液后浸泡 30s-1min。甩板倒液要迅速干脆。倒液后在吸水紙上拍板，選用無粉塵和碎屑的吸水紙。需要用力拍板，使孔內沒有可見液體掛壁；但也不能太重，不能讓樣品干太久。酶標板拍干后立即做后續的加液。

顯色反應的關鍵點

ELISA 實驗是個酶促底物顯色反應，隨時間增加，顯色變深，所以選擇*佳時間終止反應是得到準確的標準的曲線和樣本濃度的重要因素。終止過程要*。使用的 TMB 底物時*終止點是黃色，不會有任何程度的藍色或綠色，終止過程中必要時可以震蕩 96 孔板，或用槍頭抽吸混勻（終止液含強酸，避免腐蝕）。

 數據分析

按照說明書推薦的數據分析方法做曲線擬合及分析。說明書中的標準曲線是在的實驗室中，由非常有經驗的操作人員得到的結果。客戶的標準曲線和說明書中的標準曲線可能存在不同，但不等于不好。通常判斷標準曲線合格的標準為：：背景OD 值 <0.2；點 OD 值>1.0；相關系數 R2 接近或等于 1。只要滿足這些條件的標準曲線都是可以使用的。