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            白色念珠菌PCR試劑盒檢測程序與收集血樣

            閱讀:1665          發(fā)布時間:2021-1-27

            白色念珠菌PCR試劑盒試劑與收集血樣:

            1.  收集標本:血清、血漿(EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測, 2-8 ℃ 保存48 小時;更長時間須冷凍( -20   ℃或 -70   ℃ )保存,避免反復(fù)凍融。

            2.  標準品液配制:使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 設(shè)標準 管 8 管,管加標本稀釋液 900ul ,第二至第八管加入標本稀釋液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的標準品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七 管 中吸出 500ul 棄去。第八 管 為空白對照。

            3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋( 示例: 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水)。

            4.  洗滌液:用重蒸水 1:20 稀釋(示例:1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水)

            白色念珠菌PCR試劑盒檢測程序:

            1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

            2.  洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。

            3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

            4.  洗板:同前。

            5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

            6.  洗板:同前。

            7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

            8.  每孔加入100ul 終止液混勻。

            9.  30分鐘內(nèi)用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

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