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            熒光定量PCR實驗時的好方法

            閱讀:1900      發布時間:2020-7-18
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            實時熒光定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍,具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材:96孔光學反應板配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合光學膜,0.2ml光學八聯反應管配合平蓋的光學八聯管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家,例如在使用單管或者8連管做實驗時,如果在樣本數量不多的時候,建議在樣品加熱塊(TRAY)上對稱的安放樣品,并且先放在第6列或者第7列,然后逐漸向兩邊放置。這樣熱蓋壓下來的時候不至于發生傾斜,每個反應管的受力和受熱都比較均勻,提高了孔與孔之間的數據精密性。又例如使用96孔板做實驗的時候,建議使用光學膜代替蓋子來密封反應孔。封膜的方法要先沿著96孔板的縱向壓膜,然后在橫向,后在沿著板的邊緣按壓密封。Pilot5-8T凍干機應用示例(熒光PCR凍干):

            1. 探針、底物、引物原料要求確定。
            2. 凍干溶液配方開發,采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
            3. 選擇適合的包材和模具。
            4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
            5. 確定配方及工藝。
            6. 穩定性測試。
            7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
            8. 整個環節注意環境、設備、人員的結合。

             

            型號

            Pilot3-6T

            Pilot5-8T

            Pilot7-12T

            Pilot10-15T

            凍干面積

            0.42

            0.56

            0.84

            1.05

            22西林瓶裝量(20ML

            ≥900

            ≥1170

            ≥1500

            ≥2100

            16西林瓶裝量(5ML

            ≥1700

            ≥2210

            ≥3100

            ≥4100

            冷阱溫度(空載)

            -85

            真空度(空載)

            ≤1Pa

            板層溫度(空載)

            -55

            板層制冷方式

            硅油循環

            板層數量

            3+1

            4+1

            4+1

            5+1

            板層尺寸(mm

            350*400

            350*400

            350*600

            350*600

            捕水能力

            6L

            8L

            12L

            10L

            凍干效率

            3L/24H

            5L/24H

            7L/24H

            10L/24H

            板層間距

            100mm

            80mm

            90mm

            100mm

            穿墻隔離

            凍干曲線擬合度

            100%

            100%

            100%

            100%

            晶型控制

            蒸汽分壓控制

            升華結束判定

            凍干終點測試

            壓塞

            液壓

            整機尺寸 (約)

            W860*D1400*H1800

            W860*D1400*H1800

            W860*D1700*H1900

            W860*D1700*H1900

             

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