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血清實(shí)驗(yàn)方法原理
實(shí)驗(yàn)方法原理
不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同，尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng)。檢測(cè)不同批次的血淸，然后大批量購(gòu)買血清不僅能節(jié)約經(jīng)費(fèi)且能減少實(shí)驗(yàn)條件引起的差異，某些批次血清可能含有毒性或抑制生長(zhǎng)的化合物。
不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同，尤其是對(duì)克隆細(xì)胞的生長(zhǎng)。檢測(cè)不同批次的血淸，然后大批量購(gòu)買血清不僅能節(jié)約經(jīng)費(fèi)且能減少實(shí)驗(yàn)條件引起的差異，某些批次血清可能含有毒性或抑制生長(zhǎng)的化合物。
實(shí)驗(yàn)步驟
1) 從不同生產(chǎn)廠商得到 100ml 的批次的試驗(yàn)血清。
2) 用本實(shí)驗(yàn)室常用的 2~3 種細(xì)胞來(lái)檢測(cè)血清。
3) 將 lml 含有 20% 的上述待檢血清的培養(yǎng)液加于 9 個(gè)培養(yǎng)皿中（35-mm), 每種批次的血清用 9 碟細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)行檢測(cè)。
4)9 碟中每 3 碟接種入 500、1000、2000 個(gè)細(xì)胞。如果細(xì)胞存活率較高，細(xì)胞數(shù)可降低。細(xì)胞不必長(zhǎng)滿，但應(yīng)長(zhǎng)到形成足夠密度的單個(gè)克隆。細(xì)胞應(yīng)在不含血清的培養(yǎng)液屮稀釋，以免殘留血淸遺留在現(xiàn)有的培養(yǎng)液中。細(xì)胞應(yīng)加至體積為 1 ml 以便血清終濃度為 10%。現(xiàn)用的血清作為該方案的內(nèi)標(biāo)。
5) 配制 80 ml 含待檢血清濃度為 10% 的培養(yǎng)液。用該培養(yǎng)液每周給細(xì)胞換液兩次，共兩周。克隆在此期間應(yīng)較明顯。
6) 進(jìn)行克隆染色，比較不同批次血清的克隆數(shù)。克隆的染色用 1xPBS 漂洗，瀝干 PBS 后，加人 2 ml 的 Wright 染液（Fisher Scientific)，室濕染色 8 分鐘后，加人 2 ml 水, 室溫放置 10 分鐘后用水漂洗，觀察克隆的數(shù)量和大小。