雞傳染性法氏囊病測試劑盒

1 抗原預(yù)包被板條 1塊 7 底物B液 6ml

2 酶結(jié)合物 12ml 8 終止液 6ml

3 濃縮的抗VP2單抗 110ul 9 陰性對照 50μl

4 單抗稀釋液 12ml 10 陽性對照 50μl

5 10倍濃縮洗滌液 50ml 11 封板膜 2張

6 底物A液 6ml 12 說明書 1份

?雞傳染性法氏囊病毒檢測試劑盒檢測雞血清中的雞傳染性法氏囊病病毒中和抗體，用于評估養(yǎng)雞場雞傳染性法氏囊病疫苗免疫產(chǎn)生的中和抗體的狀況及感染雞的血清學(xué)輔助診斷。

需自備的設(shè)備及試劑

微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。 一次性移液器吸頭。 量筒：500ml。 96孔板酶標(biāo)儀。 蒸餾水或去離子水。 洗瓶或洗板機(jī)。

樣品制備

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

抗VP2單抗工作液的準(zhǔn)備（現(xiàn)配現(xiàn)用）

先計(jì)算好單抗工作液的用量，再將101倍濃縮的抗VP2單抗按1：101的體積比用單抗稀釋液稀釋（例如：900μl單抗稀釋液中加9μl濃縮的抗VP2單抗，可以滿足10個微孔的用量；每次稀釋時應(yīng)多稀釋100μl，以避免加樣時的損耗而造成液體量不足）。

注意事項(xiàng)

試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2～8℃。 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應(yīng)該注意防護(hù)。 TMB（底物B液）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑。 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2～8℃)。 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。 嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得*的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須準(zhǔn)確。

操作步驟

取預(yù)包被的檢測板（根據(jù)樣品*，可拆開分次使用），加入待檢血清10μl到檢測板孔底，同時設(shè)陰性、陽性及空白對照各1孔，取陰性及陽性對照各10μl分別加入反應(yīng)孔中，立即加入90μl單抗工作液，空白對照僅加入100μl單抗稀釋液。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出）。 蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗3次。每次用洗滌液注滿板孔（約350μl），靜置1分鐘后甩掉。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干。 每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌3次, 方法同2。切記*在干凈吸水紙上拍干。 每孔先加底物A液50μl、再加底物B液50μl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。 每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

以空白對照調(diào)零用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度A值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對照孔A450值小于或等于0.8，陰性對照孔A450值必須大于1.2。如果試驗(yàn)無效，試驗(yàn)中的操作值得懷疑，試驗(yàn)應(yīng)重做，并仔細(xì)檢察各組分。

VP2抗體的陽性、陰性通過計(jì)算樣品與陰性對照的比值（S/N）進(jìn)行判定：

如果S/N值小于0.8，樣品判定為陽性。

        2.如果S/N值大于或等于0.8，樣品判定為陰性。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。

法氏囊位于泄殖腔的背側(cè)，也稱腔上囊，是禽類*的免疫器官，在70-80日齡時體積*，以后逐漸消退，性成熟時消失。該病引起雛雞免疫抑制，故對馬立克氏病和新城疫疫苗接種的反應(yīng)能力下降，也使病雞對球蟲、大腸桿菌、腺病毒和沙門氏桿菌更易感，造成養(yǎng)雞業(yè)的巨大損失。