雞新城疫病毒抗體檢測試劑盒

EK-920-110-NDV雞新城疫病毒抗體檢測試劑盒Chicken Anti-Newcastle Disease Virus (NDV) Ig’s ELISA kit

相關背景介紹：

雞新城疫（New Castle disease），由副粘病毒引起的高度接觸性傳染病。又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟 。常呈急性敗血癥狀 。主要特征是呼吸困難、便稀、神經紊亂、黏膜和漿膜出血。死亡率高，對養雞業危害嚴重。1926年首先發現于印度尼西亞，不久又在英國新城發現，世界各國均有流行記載。有強毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型（即緩發型）、中等毒力型（即中發型）、強毒力型（即速發型）3型。多數高強度毒力株常屬嗜內臟型新城疫病毒。雞科動物都可患罹本病。家雞易感，雛雞比成年雞易感性更高。可達 44℃，精神萎頓，羽毛松亂，呈昏睡狀。雞新城疫（ND）是由雞新城疫病毒引起的雞的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病。

雞新城疫病毒抗體檢測試劑盒測試原理
酶免測定法原理遵循典型的競爭抑制機制。存在于標準樣本，對照樣本和受測樣本中的未標記的抗原與酶標抗原結合物之間相互競爭，爭奪與事先包被在微孔板上的數量有限的抗體發生免疫反應的機會，然后通過洗滌和澄清去掉未被結合的物質。洗滌后再加入酶底物，*加入終止液終止酶促反應。吸光度可以通過酶標儀讀取。形成的顏色的強度將與被檢測的樣本中的皮質醇的濃度成反比。
應用一套標準繪制標準曲線，從曲線上直接讀取到受測樣本和對照樣本中的含量。
操作中的注意事項
1. 在使用本試劑盒之前，使用者要對本說明書有很深刻的了解，嚴格認真按照操作指南進行操作；
2. 為了評估結果的可靠性，對照樣品含量應包含從高到低的各種水平；
3. 當要用到水稀釋或重構時，請使用蒸餾水或者去離子水；
4. 為減少與潛在的有害物質接觸，在處理試劑盒及人的樣本的時候請戴上手套；
5. 所有試劑在使用前拿到室溫下溫和搖勻，避免反復凍融試劑和樣本；
6. 在每次運行前確定校準曲線；
7. 每次檢測時都應該包含校準液，并確保其檢測值落在可信任區間內；
8. 不規范的程序操作，不精確的吸取，不充分的洗滌以及不正確的儲存都有可能導致測試值不在確定的范圍內；
9. 讀取微孔板時，微孔板中如果出現氣泡將會影響吸光密度（OD 值），所以在讀數前請小心移去微孔板中的氣泡；
10. 底物溶液TMB 有很強的光敏感性，應保持避光保存。如果發現溶液現藍色，可能是由于不穩定或者已經被污染，溶液將不能再使用；
11. 在調制底物溶液和終止液時，不要使液體接觸到吸管的金屬；
12. 為了避免污染，請使用一次性吸嘴吸取各種試劑和樣品，對照樣品等；
13. 切勿將不同批次的試劑組合使用，不使用任何過期產品；
14. 試劑盒必須當成是危險廢棄物并遵照國家有關制度進行銷毀。


檢測流程
樣本預處理：不需要
使用前將所有試劑恢復到室溫狀態，準備校準液、參照樣本和待測樣本，一式幾份。一旦開始，直到測試完中間不能中斷。
1. 配制皮質醇-HRP 結合物溶液和洗滌液。
2. 取出所需數量的微孔條。將不用的微孔條重新封裝好放回冰箱。
3. 將各種校準液，參照樣品和受測樣品各吸取20μl 到相應的已做好標記的孔里面。
4. 吸取100μl 的結合物工作液到添加到每個孔（推薦使用多通道吸管）。
5. 室溫下在板振動篩（大約200 轉/分鐘）下孵育45 分鐘。
6. 用300μl 稀釋的洗滌液沖洗所有的孔三次，用吸水紙吸干板上所有水分，并確保其被吸干。建議使用清洗器。
7. 吸取150μl 的TMB 底物溶液滴入到所有的孔中，并在中間間隔一段固定時間。
8. 室溫下在板振動篩孵育15-20 分鐘或者直到校準液A 呈現深藍色，得到理想OD值。
9. 吸取50μl 的終止液滴到所有孔，間隔時間與第7 步相同。
10. 加入終止液20 分鐘后，用微孔板讀數器讀取在450nm 濾光片下板孔的OD值。

計算
1. 計算每種校準液所有重復檢測樣本的平均OD 值
2. 以OD 值為Y 軸，校準液的濃度為X 軸在半對數坐標紙上繪制校準曲線。如果有免疫測試軟件，推薦使用4 參數曲線。
3. 計算待測樣本所有重復檢查樣本的平均OD 值
4. 在校準曲線上直接讀出待測樣本的OD 值
5. 如果樣品的讀數超過60μg/dl,將其與校準液A 以不超過1：8 的比例稀釋，所得結果乘以稀釋倍數。