熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項

　　熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項

　　PCR板

　　PCR板是一種在聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中主要作為參與擴增反應的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。

　　PCR板材質

　　其本身材質在當今主要以聚丙烯(PP)為主，能更好適應PCR反應過程中反復高低溫設定，并且能夠實現高溫高壓滅菌操作。為配合排槍、PCR儀等實現高通量操作，較常使用的為96孔或384孔的PCR板。板型符合SBS國際標準，且為適應不同廠家的PCR儀，根據裙邊設計又可分為無裙邊、半裙邊、升裙邊和全裙邊四種設計模式。

　　PCR板常見顏色

　　有透明和白色，其中白色更適合用于新型的實時熒光定量PCR。

　　PCR板用途

　　廣泛應用于遺傳、生化、免疫、醫藥等領域，不僅應用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA，RNA的地方，屬于實驗室一次性易耗品。

　　如何正確使用96孔PCR孔板

　　PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號的新型熒光定量PCR儀(如伯樂CFX系列，ABI 7500fast 以上型號， Roche 480系列)，但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應選擇透明的。

　　PCR板根據裙邊設計又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設計模式，不同廠家的熒光定量PCR儀會設計不同的切角或邊緣凸起，請選擇適合該PCR儀的板子。

　　PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板)，根據機型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯誤對機器造成破壞和加熱不均導致數據失真。

　　當使用96孔板做熒光定量PCR實驗的時候，推薦使用光學膜代來密封反應孔。正確的封膜方法是：先沿著96孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著板的邊緣按壓使之密封。具體手法見下面圖示：

　　加樣后會在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應體系內也會有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請使用專用的微孔板離心機解決上述問題。

　　PCR板屬于一次性消耗品，生產一次成型，不建議剪開使用容易造成實驗誤差增加，不能清洗或部分重復利用。不要為了節省一點小錢，而給實驗帶來后續分析上的困擾。

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