克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

一、用途和原理：
  克氏雙糖鐵瓊脂(Kligler Iron Agar)用于鑒別腸道菌發酵葡萄糖和乳糖，及產生lhq的生化反應。
蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素、礦物質;乳糖、葡萄糖為可發酵糖類，其產酸時通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為lhq，與鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑。
二、使用方法：
  1、稱取克氏雙糖鐵瓊脂55g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝試管(裝量宜多些)，121℃高壓滅菌15min，制成高層斜面，冷卻后備用。
  2、挑取待檢菌的新鮮培養物，穿刺接種混合克氏雙糖鐵瓊脂斜面。接種時先在斜面劃線，然后再穿刺底層。
  3、將試管放入培養箱內36±1℃培養18—24h。
  4、觀察結果。觀察斜面與底層的反應情況。
三、質量控制：
  配成的培養基為紅色，下列菌株接種后于36±1℃培養24h結果如下：

四、常見問題：
（1）克氏雙糖鐵試驗時間為什么要控制在18-24h？KIA時間長了會怎樣,短了會怎樣？
答：時間短了細菌發酵不夠充分,現象不明顯。時間長了細菌發酵過度,因為KIA是利用酸堿指示劑顯色的，時間長了自然會引起一些改變而影響判斷，同時各種副反應也會造成很大影響。相對來說,時間稍微長一點兒影響不大，但不能長得太夸張。
（2）MIU試驗,為什么大腸埃希菌培養24h之后，培養基出現了氣泡？志賀菌的培養基就沒有？
答：因為大腸埃希菌是產氣的,而志賀菌不產氣。

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