小鼠轉錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標，本生，您信任的合作伙伴!本生試劑盒

　　?小鼠轉錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒實驗使用說明書主要包括以下內容?：

　　貨號：BS-9406 小鼠轉錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒

　　一、實驗準備

　　?試劑盒保存與平衡?：試劑盒應保存在2-8℃條件下，使用前需室溫平衡20分鐘?。

　　?實驗器材準備?：準備必要的實驗器材，如酶標儀(450nm)、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱等?。

　　二、樣本收集與處理

　　?血清?：使用不含熱原和內毒素的試管收集血液，3000轉離心10分鐘分離血清和紅細胞?。

　　?血漿?：采用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉離心30分鐘取上清?。

　　?細胞上清液?：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物?1。

　　?組織勻漿?：將組織加入適量生理鹽水搗碎，3000轉離心10分鐘取上清。若樣本不及時檢測，應按一次用量分裝并凍存于-20℃?。

　　三、實驗步驟

　　?加樣?：

　　在酶標包被板上設定標準品孔、待測樣品孔和空白孔。

　　標準品設定5個濃度點，每個濃度設定平行孔，加入50微升不同濃度的標準品。

　　待測樣品孔先加樣品稀釋液40微升，再加待測樣品10微升(最終稀釋度為5倍)。

　　空白孔加入50微升蒸餾水?。

　　?溫育?：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?。

　　?配液?：將濃縮洗滌液按倍數稀釋后備用?。

　　?洗滌?：揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復5次，拍干?。

　　?加酶?：每孔(除空白孔外)加入酶標試劑50微升?。

　　?再次溫育?：操作同第一次溫育步驟?。

　　?再次洗滌?：操作同洗滌步驟?。

　　?顯色?：每孔先加入顯色劑A50微升，再加入顯色劑B50微升，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘?。

　　?終止?：每孔加終止液50微升，終止反應(顏色由藍轉黃)?。

　　?測定?：以空白孔調零，在450nm波長下依序測量各孔的吸光度(OD值)，測定應在加終止液后15分鐘以內進行?。

　　四、注意事項

　　試劑盒僅用于科學研究，不得用于醫學診斷?。

　　實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封并低溫干燥保存?。

　　嚴格按照說明書操作，避免交叉污染和試劑浪費?3。

　　五、實驗室自備器材試劑

　　96孔讀板儀器

　　自動洗板機

　　移液器和槍頭(建議使用多通道移液器/排槍)

　　Eppendorf管

　　洗板緩沖液(如neutral PBS或TBS，試劑盒內提供足量，如需額外緩沖液可參考配方配制)?4請按照說明書嚴格操作，以確保實驗結果的準確性和可靠性。