大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒實驗使用說明書.doc

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　　大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒的實驗使用說明書如下：

　　1. 實驗目的

　　本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中巨噬細胞移動抑制因子(MIF)的含量?。

　　2. 實驗原理

　　采用雙抗體夾心法測定標本中大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)水平。用純化的大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，依次加入標本、標準品及HRP標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經過洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的巨噬細胞移動抑制因子(MIF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品濃度?。

　　3. 試劑盒組成

　　封板膜：2片

　　說明書：1份

　　密封袋：1個

　　標準品：2700ng/L，0.5ml×1瓶

　　酶標包被板：1×48或1×96

　　樣品稀釋液：3ml×1瓶或6ml×1瓶

　　顯色劑A液：3ml×1瓶或6ml×1瓶

　　顯色劑B液：3ml×1瓶或6ml×1瓶

　　終止液：3ml×1瓶或6ml×1瓶

　　濃縮洗滌液：(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶?。

　　4. 樣本處理及要求

　　血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)，收集上清?。

　　血漿?：使用EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心，收集上清?。

　　尿液?：無菌管收集，離心后取上清?。

　　細胞培養上清?：檢測分泌性成分時，直接收集上清;檢測細胞內成分時，需反復凍融細胞懸液后離心?。

　　組織標本?：切割后稱重，加入PBS勻漿，離心后取上清?。

　　5. 實驗步驟

　　將標準品、標本依次加入包被微孔板中，溫育并洗滌?。

　　加入HRP標記的檢測抗體，溫育并洗滌?。

　　加入底物TMB顯色，反應終止后測定吸光度(OD值)?。

　　根據標準曲線計算樣品濃度?。

　　6. 注意事項

　　試劑盒需在-20℃保存，開封后酶標板需密封保存?。

　　標本采集后應盡快檢測，避免反復凍融?。

　　實驗操作需在相同環境條件下進行，以減少誤差?。

　　7. 結果計算

　　以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線，根據樣品的OD值計算濃度，再乘以稀釋倍數?。

　　以上為實驗使用說明書的詳細內容，供參考?。