大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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　　大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的實驗使用說明書如下：

　　BS-3496  大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)elisa試劑盒

　　1. ?實驗原理?

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法測定樣本中大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)的含量。首先用純化的PICP抗體包被微孔板，形成固相抗體。隨后加入樣本或標準品，與HRP標記的PICP抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。洗滌后加入底物TMB顯色，顏色的深淺與樣本中PICP濃度呈正相關，通過酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)并計算濃度?。

　　2. ?試劑盒組成?

　　酶標板(預包被)：96孔

　　標準品：400ng/ml

　　酶標抗體工作液：12ml

　　標本稀釋液：12ml

　　濃縮洗滌液：50ml

　　TMB底物：12ml

　　終止液：12ml

　　第一抗體工作液：12ml?。

　　3. ?樣本處理?

　　血清/血漿?：采集后1000×g離心10分鐘，分離上清液。

　　細胞培養上清液?：3000轉離心10分鐘去除顆粒。

　　組織勻漿?：加入生理鹽水搗碎，3000轉離心10分鐘取上清?。

　　4. ?實驗步驟?

　　加樣?：每孔加入標準品或待測樣本100μl，37℃孵育120分鐘?。

　　洗滌?：用洗滌液充分洗滌4-6次，濾紙印干?。

　　加入第一抗體?：每孔加入第一抗體工作液100μl，37℃孵育60分鐘?。

　　顯色?：每孔加入TMB底物100μl，避光孵育15-30分鐘?。

　　終止反應?：每孔加入終止液50μl，立即測定OD值?。

　　5. ?結果計算?

　　以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線，通過曲線計算樣本中PICP濃度?。

　　6. ?注意事項?

　　試劑盒需在2-8℃保存，避免反復凍融?。

　　實驗過程中需使用不含熱原和內毒素的試管?。

　　顯色反應需避光進行，終止后立即測定?。

　　7. ?檢測范圍與靈敏度?

　　檢測范圍：1.25-80ng/mL

　　檢測限：0.49ng/mL?。

　　以上為大鼠I型前膠原羧基端肽(PICP)ELISA試劑盒的詳細使用說明，適用于科研實驗中的定量檢測?。