大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒實驗使用說明

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　　BS-3649 大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒

　　一、實驗原理

　　采用雙抗體夾心法檢測樣本中HMGB-1含量。通過包被抗體捕獲目標蛋白后，依次加入檢測抗體和酶標記物形成復合物，最終通過TMB顯色反應測定濃度?。

　　二、樣本處理要求

　　血清?：室溫凝固10-20分鐘后2000-3000rpm離心20分鐘?

　　血漿?：需使用EDTA/檸檬酸鈉抗凝，離心后取上清?

　　組織勻漿?：按重量加入PBS勻漿后離心?

　　保存條件?：建議分裝凍存于-20℃，避免反復凍融?

　　三、試劑盒組成

　　包含包被板、標準品(濃度通常為0-160μg/L)、生物素標記抗體、鏈霉親和素-HRP、顯色液(TMB)及終止液等?。不同規格試劑盒組分體積存在差異(如48孔/96孔配置)?。

　　四、操作步驟

　　標準品稀釋?：按說明書梯度稀釋?

　　加樣順序?：依次加入標準品/樣本→檢測抗體→酶結合物?

　　溫育條件?：37℃反應，具體時間參照不同試劑盒要求(通常30-60分鐘)?

　　顯色終止?：加入TMB顯色15分鐘后加終止液?

　　五、注意事項

　　濃縮洗滌液需1:20稀釋，使用前需溶解結晶?

　　避免底物接觸金屬器械，顯色后需立即檢測OD值?

　　計算結果時需注意樣本稀釋倍數(通常需×5)?

　　六、結果計算

　　在450nm波長下測定OD值，通過標準曲線計算濃度?。建議使用專業酶標儀分析?。

　　注：不同品牌試劑盒可能存在參數差異，請以實際說明書為準?。