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            大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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              以下是關于大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒的實驗使用說明:

              BS-3461   大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒

              一、檢測原理

              采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入預先包被NN-T4抗體的酶標板中,經溫育后形成抗體-抗原復合物,洗滌后加入酶標工作液,再次溫育后形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。加入底物TMB顯色,顏色深淺與NN-T4濃度呈正相關。

              二、樣本要求

              血清/血漿?:采集后室溫靜置2小時或4℃過夜,1000g離心20分鐘取上清,避免反復凍融。

              組織勻漿?:用預冷PBS(0.01M, pH=7.4)按1:9重量體積比勻漿,5000×g離心5-10分鐘取上清。

              注意事項?:含NaN3的樣本會抑制HRP活性,需避免使用。

              三、實驗步驟

              試劑準備?:將濃縮洗滌液稀釋30倍,標準品按說明書稀釋。

              加樣?:標準品和樣本分別加入對應孔位,建議做復孔。

              孵育?:37℃溫育60分鐘,洗滌去除未結合物。

              加酶標抗體?:加入HRP標記抗體,再次溫育30分鐘并洗滌。

              顯色?:加入TMB底物A/B液,避光反應15分鐘。

              終止與檢測?:加終止液后,450nm波長測OD值。

              四、數據處理

              以標準品濃度為橫坐標,OD值為縱坐標繪制標準曲線。

              根據樣本OD值計算NN-T4濃度,板內/板間變異系數應<10%。

              五、注意事項

              試劑盒需2-8℃保存,有效期通常為6個月。

              顯色時間需嚴格控制,避免過度反應。

              實驗環境需清潔,避免交叉污染。

              如需更詳細的參數(如標準品濃度范圍、線性回收率等),建議參考試劑盒配套說明書。

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