人腺苷激酶的高通量測(cè)定

PRECICE ^® ADK 檢測(cè)試劑盒 提供了一種方便、高通量兼容且非放射性的檢測(cè)方法，用于 ADK 活性的體外測(cè)量和新型 ADK 抑制劑的藥物發(fā)現(xiàn)。該試劑盒是藥物發(fā)現(xiàn)的新工具，可通過 HTS 搜索新型 ADK 抑制劑。

原理：
腺苷激酶使用ATP作為磷酸供體。它將 ATP 的末端磷酸基轉(zhuǎn)移到底物上，產(chǎn)生副產(chǎn)物 ADP。該測(cè)定基于使用肌苷作為替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷單磷酸脫氫酶）的偶聯(lián)反應(yīng)，用于直接測(cè)量 ADK 形成的肌苷單磷酸 (IMP)。在肌苷和 ATP 存在下，ADK 催化肌苷磷酸化形成 IMP 和 ADP。然后，在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化為 XMP，從而形成 NADH ₂。

主要特征：

方便的

•非放射性
•均質(zhì)
• 340nm 處連續(xù)吸光度監(jiān)測(cè)

定量

• IMP 立即以定量方式轉(zhuǎn)化為 NADH2，以便進(jìn)行準(zhǔn)確的動(dòng)力學(xué)分析

高通量格式

•該測(cè)定在標(biāo)準(zhǔn)多孔微孔板中進(jìn)行
•使用配有 340 nm 濾光片的通用讀板器
•滿足 HTS 測(cè)定的要求（Z' 因子 0.68）

可靠的

•使用已知的 ADK 抑制劑 A-134974 和已知可被腺苷激酶磷酸化的核苷類似物利巴韋林進(jìn)行驗(yàn)證

ADK在人體中的作用

腺苷激酶是一種普遍存在的酶，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的腺苷 (AR) 濃度，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的重要調(diào)節(jié)劑，也是參與缺氧、炎癥和傷害感受的信號(hào)分子。腺苷激酶與腺苷脫氨酶一起調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的腺苷濃度。抑制腺苷激酶會(huì)導(dǎo)致局部腺苷濃度選擇性增加，并降低體內(nèi)癲癇發(fā)作易感性和傷害感受⁽³⁾。 ADK 功能障礙與多種病理有關(guān)，包括糖尿病⁽¹³⁾、癲癇⁽⁶⁾和癌癥。因此，ADK成為一個(gè)合理的治療靶點(diǎn)，腺苷調(diào)節(jié)藥物已被廣泛應(yīng)用。經(jīng)過測(cè)試⁽¹⁾作為新的鎮(zhèn)痛和抗炎藥物⁽⁴⁾用于治療精神分裂癥⁽⁷⁾或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷⁽⁸⁾。

驗(yàn)證

使用PRECICE® ADK 篩選測(cè)定試劑盒篩選 ADK 抑制劑和 IC50 測(cè)量，已使用化合物 A-134974（一種已知的 ADK 抑制劑）（Sigma-Aldrich，獲得 Abbott Laboratories 許可）進(jìn)行了驗(yàn)證。 Z'-因子根據(jù) 44 個(gè)陰性（無 ADK 抑制）和陽性（500nM A-134974 抑制 ADK）計(jì)算得出，測(cè)量結(jié)果為 0.68，對(duì)于篩選測(cè)定而言，這是一個(gè)出色的性能水平

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