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            電泳儀的毛細(xì)管柱制備方法介紹

            閱讀:1806      發(fā)布時(shí)間:2022-11-26
            分享:
               毛細(xì)管凝膠電泳儀將凝膠電泳儀對(duì)生物大分子的分離能力與毛細(xì)管電泳儀的快速、微量和定量分析相結(jié)合,是當(dāng)今分離度高的一種分離技術(shù)。將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管中交聯(lián)生成凝膠,以凝膠作為載體進(jìn)行電泳,凝膠具有多孔性,類似分子篩的作用,樣品分子按大小分離。
              電泳儀的毛細(xì)管柱制備方法如下:
              1.檢測(cè)窗口制備:
              毛細(xì)管的聚酰亞胺涂層不透明,檢測(cè)窗口部位的聚酰亞胺必須剝離除去,剝離長(zhǎng)度為2-3mm。常用剝離方法有硫酸腐蝕法、灼燒法和刀片刮除法。
              2.毛細(xì)管內(nèi)壁修飾:
              用120℃熱空氣吹,然后用室溫氨氣沖洗2h,再用50%3-甲基丙烯酰氧丙基-三甲氧基硅烷充滿12h,后用甲醇和水沖洗。
              3.緩沖溶液制備:
              將1.1g Tris和0.01g EDTA溶于100mlL 7M尿素溶液中,用NaH2PO4調(diào)至pH=8.6。
              4.單體溶液制備:
              將29g丙烯酰胺和1g N-甲叉雙丙烯酰胺溶解在100mlL緩沖溶液中。
              5.催化劑制備:
              將0.2g過硫酸銨溶于2mL緩沖溶液中。
              6.凝膠溶液制備:
              將10mlL單體溶液加入到30mlL緩沖溶液中,用4μL催化劑溶液和2.5μL四甲基乙二胺(TEMED)預(yù)聚合45min。
              7.灌注聚合:
              將上述凝膠溶液注入毛細(xì)管到無氣泡,將柱兩端浸入緩沖溶液中聚合數(shù)小時(shí)。

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