Vero細胞培養接種工藝技術

Vero細胞近年來作為新時代制藥產業的熱門細胞，成為轉基因、蛋白、抗體類制藥企業普遍使用使用的載體工具。使用細胞生物反應器進行Vero細胞的規模化增殖的接種工藝如下：

一、實驗前準備：
細胞∶Vero 細胞（ATCC級別的 ）、DMEM培養基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌濾膜、CT-3微載體、2L實驗室生物反應器，5L搏旅/楚怡細胞培養生物反應器、搖瓶、細胞培養瓶、水浴鍋。

二、接種實驗方法
1.微載體的預處理和滅菌： 接種實驗前的微載體需要用無鈣、鎂離子的PBS磷酸鹽緩沖液進行吸脹、洗滌，之后進行高壓滅菌處理，工藝控制參數為：吸脹質量濃度不超過50 g·L-1，滅菌溫度121 ℃，20 min。

2.轉瓶接種操作：
將培養瓶內的 Vero 細胞接種于500ML的轉瓶內，CT-3 微載體濃度為 3g/L，并加入適量的混合牛血清的DMEM培養基，此時接種密度以2.0×10°cells/mL為宜。
在微載體細胞生長過程中，可適當補加微載體 2g/L，使微載體濃度達到 5g/L即可接種在5L細胞培養生物反應器中作為種子細胞進行培養。

3.規模擴培接種操作
當細胞生長到達一定密度時，將細胞及新的微載體一起轉入大容積的微載體培養養反應器中，進行細胞培養。此過程的工藝參數為：溫控： 37士0.1℃，溶解氧為 50%空氣飽和度，攪拌器的轉速維持在20～32 r/min即可。當細胞密度達 1.1×10'cells/mL時，即可進入下游環節進行產品生產。

介于國外生物反應器成本高昂，售后服務不便，型號固定、貨期長等因素，我國自主研發設備生產的生物反應器目前已廣泛應用于制藥生產、新藥開發、蛋白研發、轉基因產品等環節，一些國內生物反應器專業生產商甚至可根據客戶要求的尺寸進行定制化操作,比如搏旅除生產固定型號規格外，還可以根據客戶要求定制不同級別、規格的生物反應器、發酵罐主要用于微生物培養、種子制備、浮細胞培養、貼壁細胞培養、微載體培養等，實現了廠商直供，一罐多用，滿足不同的用戶需求。