實例應用：MDCK細胞的生物反應器微載體培養方法

MDCK細胞屬于動物細胞一般采用Cytodex 作為微載體Cytodex 主要有兩個系列 即：Cytodex 和 Cytopore ，其中 Cytodex 1適合大多數的貼壁細胞。

采用Cytodex 微載體的優勢主要有以下幾點：

1. Cytodex 微載體的表面比較適宜細胞的粘附和延展。

2. 優化后的大小和密度對于細胞懸浮較為有利，適宜細胞的生長和高產。

3. 這類細胞的細胞基質具有一定的生物惰性，可以減少攪拌培養過程中的剪切力損害。

4. Cytodex 微載體具有較好的可放大性。試驗證明，良好的培養環境下采用搏旅懸浮細胞培養生物反應器可達 15,000 L產量規模，而采用貼壁細胞微載體培養生物反應器可達 6,000 L 左右的規模。

MDCK細胞的生物反應器微載體培養方法主要有以下幾個步驟：

一、微載體的前處理：

用pH為7.4的PBS緩沖液將Cytodex系列微載體浸泡3~24H;反復清洗后用高壓進行滅菌，冷卻。并用含牛血清的培養基清洗后并加入同體積的培養基備用。2）

二、MDCK種子細胞的解凍復蘇：

取出凍存中MDCK細胞，置于37℃-39℃的恒溫水浴振蕩器中進行解凍復蘇，再植入細胞培養瓶中進行細胞培養。

三、細胞的轉瓶擴培

當細胞培養瓶中的細胞生長到90%密度時用細胞消化液處理細胞，并接入搖瓶進行分瓶培養，當細胞生長到同樣密度時，用培養基稀釋接入生物反應器進行擴培。

四、生物反應器微載體培養：

MDCK細胞接種可以依照 比例為2-25g微載體/L（培養基）、5-50個細胞/載體的比例接入生物反應器中進行擴大培養。具體詳盡參數可以根據相關的《胞培養操作說明》進行設定調整。

五、病毒的感染接種：

當生物反應器內培養的MDCK細胞90%在微載體表面形成致密層后，應當停止攪拌，當微載體沉淀于生物反應器的地步是，更新培養基，按照TPCK胰酶1-20μg/ml、病毒感染復數0.01-1接種病毒培養2h后，補充培養基與原來的量相一致；

六、病毒收獲

當病毒接種10H后，需要每小時取樣觀察細胞的病變效應及CPE值，當CPE值大達80%以上時，即可進行病毒收獲、分析測定等操作環節，結合分析結果與相關《檢驗規程》執行下一步操作。

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