在生物反應器中進行HEK293細胞培養的注意事項

     293細胞系作為常用的表達外源基因的細胞株，由于具有容易轉染，生產速度快，瞬時表達力強等優勢，生物制藥企業通常利用HEK293細胞株在微載體生物反應器中規模化生產抗體類藥物。

     生物制藥領域用HEK293細胞生產抗體藥物雖具有較多優勢，但也存在缺陷，此類細胞無論是表達 E1A蛋白的HEK293A 系列還是慢病毒HEK 293FT細胞都存在著細胞貼壁性弱，產出率低的致命缺陷。

這就要求我們在培養HEK293細胞時嚴格遵相關的操作規程。在生物反應器中培養HEK293細胞系，有以下幾個方面需要注意：

一、選擇合適的培養基和補料

培養基是進行細胞培養的基礎營養物質，HEK293原代細胞主要來源于人胚腎細胞其形態類似于上皮細胞，所選用的培養基一般為MEM等動物細胞培養基。OPM-CD Trans293培養基由于不含生長因子和蛋白質也是不錯的選擇。OPM-293 ProFeed補料也有提高轉染產物表達效果的作用，可與OPM-CD Trans293培養基配合使用。合適的培養基、補料是保持393細胞良好生長的必要條件。

二、細胞轉染效率

細胞轉染后的陽性細胞比例不僅決定著細胞的轉染效率同時也決定著抗體的產能，所以提高轉染后的陽性細胞比例是HEK293細胞細胞培養的關鍵。細胞轉染前要保證傳代細胞95%以上的存活率，傳代頻率大概控制在 3d/天，傳代細胞密度一般維持在3~4×10^6 cells/ mL左右轉染時可用新鮮的培養基稀釋到合適的細胞密度有利于提升細胞轉染效率。

三、細胞生長的環境條件

細胞培養過程中，細胞內毒素會嚴重阻礙細胞生長，甚至造成細胞凋亡，作業過程中設法減少轉染載體溶液內毒素殘留是提高細胞存活率，加快細胞生長速度的重要手段之一。 另外，在細胞表達時通過生物反應器溫度控制系統調整適宜的培養溫度，也有益于增加轉化產物，從而提高細胞產物的總產量。

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