搖瓶在微生物種子制備工藝中的應用

標簽：搖瓶 緩沖液 微生物 種子制備

搖瓶種子即接種在搖瓶內用于搖瓶發酵試驗或發酵罐生產的微生物菌種。用于接種傳代第一代的種子稱為“母瓶"，用于接種傳代第二代的種子就叫做“子瓶"?！澳钙?和“子瓶"均可應用在微生物發酵罐進行規模擴培傳代培養。



一、培養基制備
在搖瓶中進行種子制備的主要目標是培養強生長活性的營養菌體，所以在配制培養基階段必須以滿足菌體生長要求為目的。比如在培養基中添加足量的營養物質，包括碳、氮源、緩沖液、無機鹽和生長因子等物質。在培養基中添加緩沖液的主要作用是調節培養基中的PH值，是培養基的PH環境長期處于穩定狀態。常用的PH調節劑主要有磷酸鹽緩沖液、PBS緩沖液等。培養基分裝完成，封口后需要置于高壓滅菌鍋中進行高壓滅菌。 滅菌完成后緩慢降壓，防止因氣壓驟降造成培養基沖擊瓶塞。

二、種子接種
在進行搖瓶種子接種時，普遍采用的是斜面法或米孢子粒計數接入的方式。 如果采用米孢子粒計數接入接種法進行接種的缺陷在于，接種量的一致性很難掌握，這樣容易導致搖瓶種子的質量穩定性差。因此，對于接種量較為敏感的菌種，一般會采用懸液接種法進行接種。懸液接種法是用蒸餾水將細胞或微生物孢子洗脫成為混合液，然后按固定體積數量接種在搖瓶種子培養基中的一種接種方法。懸液接種法增加了接種數量的均一、穩定性。 

三、振蕩培養 
搖瓶種子采用的振蕩培養搖床主要有旋轉式振蕩和往復式振蕩兩種。正常情況下生產抗生素類的企業使用較多的是旋轉式振蕩搖床。旋轉式振蕩搖床由于在主軸和從動軸間會有25mm-50mm左右的偏心距產生，所以在振蕩作用時更有利于氣體交換。部分特殊的微生物也會使用振蕩培養箱進行培養。 

四、收獲保存 
搖瓶種子在培養完成后盡量立即使用。如果臨時用不到的可放在4℃冰箱中保存，但是保存期以不超過3天為宜。為避免影響生產質量，這類冷藏處理的種子多數用于搖瓶發酵試驗或小型發酵罐實驗，一般不直接做生產用種子。

五、影響搖瓶種子的質量
影響微生物搖瓶種子質量的因素主要有：菌體濃度、培養基成分、接種密度、設備轉速等。 

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