PCR擴增儀的原理及擴增實驗中存在的問題

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PCR檢測方法有很多，其中PCR擴增儀又稱為“PCR儀"，它是PCR實驗中*的實驗室設備之一。PCR儀器大致可以分為三類：即：普通PCR儀，熒光定量PCR儀，梯度PCR儀和原位PCR儀等。 

一、PCR的原理 

在pcr擴增實驗中，PCR反應過程實質就是DNA按模板復制而發生的聚合酶鏈反應的過程，主要包括引物、dNTP、DNA靶序列、DNA聚合及PH緩沖液體系。

PCR反應過程如下：

1.通過升溫反應體系混合物一般為：94℃/15s-30s.使目標DNA雙螺旋的氫鍵產生斷裂從而形成單鏈DNA作為合成模板.

2、在反應體系冷卻至引物的TM值左右，使引物與單鏈DNA模板產生互補結合，從而實現DNA的互補擴增，這一過程也被稱之為退火。

3、擴增延伸

在PCR擴增過程中，當反應體系的溫度升高到72 ℃左右時，引物在TAQ聚合酶的作用下，以引物為起點dNTP作為底物合成新的DNA鏈條。

 以上步驟重復循環，直擴增量達到基因檢測的所需要數量即可停止循環。

使用PCR擴增儀進行PCR反應過程中常見的問題：

無明顯的擴增條帶

這種情況主要是由于以下情況產生： 

（1）Taq酶失活或Taq酶活性加入量少所造成。DNA聚合Taq酶的保存溫度一般在-20℃環境下，盡量避免反復凍融所產生的影響。

（2）混合模板反應體系中如果含有甲酸、甲醛含等雜質也會對DNA鏈上的堿基造成影響，降低PCR擴增效果。

（3）PCR儀的各反應階段適宜溫度設定也很重要，過高或過低的反應溫度，都會使DNA聚合酶產生失活。

（4）引物設置不合理或反應系統中被蛋白酶及核酸酶，這些因素也同樣會影響到DNA的合成與產出。

 （5）另外，PCR循環數不足或者延伸擴增時間短也會影響到PCR產物產量。

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