siRNA轉染試劑與轉染方法介紹

 RNA 代表核糖核酸和 siRNA——小干擾 RNA（也稱為沉默 RNA）。siRNA 是分子中的一種短 (21-23 bp) 雙鏈 RNA 核苷酸，在細胞中發揮各種生物系統的功能。siRNA轉染是“轉移"，將siRNA細胞內轉移到細胞中，這是一個涉及基因沉默的過程。為了成功優化 siRNA 轉染，需要合適的轉染試劑和轉染方法來進行體外和體內RNAi 實驗。這些過程因細胞類型和轉染方法而異。對于siRNA轉染有許多針對特定細胞類型優化的體外siRNA 轉染試劑。

siRNA轉染技術

   體內siRNA于siRNA轉染技術 應用是基于納米顆粒、聚合物或 脂質體的一種技術。

    科學家們發現 siRNA 在大規模沉默基因表達和研究基因功能方面比較有價值。此類實驗的成功通常取決于 siRNA的轉染方法。可以使用優化的 轉染試劑 和試劑盒在體外和體內轉染 siRNA。

    影響siRNA 轉染效率的因素主要包括培養細胞的生長狀況、轉染發生的條件、引入的轉染方法、以及實驗中使用的 siRNA 的質量和數量。

同時，細胞密度、體積、暴露時間和 siRNA 細胞的數量對 siRNA 轉染的成功率以及在 穩定轉染實驗中建立穩定的 RNAi 敲低細胞系也起著重要作用。

RNAi 誘導的基因沉默通常用于研究培養細胞中的基因功能。大多數情況下，這些基因功能是由引入小干擾 RNA (siRNA) 或 microRNA (miRNA) 的介入所引起的。siRNA 分子屬于雙鏈，長度為 20-24 個堿基對，終止于具有磷酸化 5' 和羥基化 3' 末端的兩個突出核苷酸。一個 miRNA 分子是單鏈的，有 22 個核苷酸長；它與 RNA 的互補片段結合形成雙鏈分子。這兩種分子都可能在細胞中自然產生，也可能是人工引入的，它們的作用可能會持續三到七天。

  siRNA體內轉染現狀

由于 siRNA 具有穩定性差、遞送效率低、生物分布不正確以及靶向特定組織等缺點，因此體內 RNAi 研究面臨了許多技術挑戰。這些技術挑戰意味著不適宜在動物身上進行 大量的RNAi 實驗。

 siRNA體內轉染主要方法：是通過 RNAi技術：即：使用 siRNA 或 miRNA 、質粒 DNA 、病毒載體等，在體內表達生成短鏈 RNA (shRNA)，隨后加工成活性 siRNA。一般來說，基于病毒的 shRNA 載體在體內提供較高的遞送效率，但構建起來比較耗費時間，并且存在免疫原性等問題。

使用 RNAi 技術面臨的主要挑戰之一是成功地將穩定的功能性 siRNA 或 microRNA 分子傳遞到目標組織。siRNA 或 miRNA 必須克服核酸酶的降解，逃避先天免疫系統的檢測，從而減少脫靶效應并被靶組織所吸收。近來研究發現對 siRNA 或 miRNA 進行化學修飾可以增加它們在體內的穩定性。這些化學修飾維持了 siRNA 分子的效力、功效和特異性，并增加了它們在生物體動態環境中的整體穩定性。

   目前市場上常用的siRNA轉染試劑主要有RFect 系列轉染試劑盒、Lipo2000、Lipo3000，RNAiMAX等都可以用于siRNA的體外化學轉染法。

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