外泌體制造需要哪些實(shí)驗(yàn)室設(shè)備

 外泌體是蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸的天然載體，在細(xì)胞間通訊中起著至關(guān)重要的作用。外泌體包含各種膜蛋白，例如內(nèi)體相關(guān)蛋白（Alix、Tsg101 和 Rab 蛋白）、四跨膜蛋白（CD63、CD81、CD82、CD53 和 CD37）和脂筏相關(guān)蛋白（糖基磷脂酰肌醇和 flotillin）。隨著近年來(lái)生物技術(shù)、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的不斷發(fā)展，外泌體有著廣泛的應(yīng)用前景，包括藥物發(fā)現(xiàn)、配體篩選和靶向藥物遞送。

  進(jìn)而即用型、高質(zhì)量的功能性外泌體的需求也越來(lái)越顯明，這種工業(yè)外泌體生產(chǎn)需要通過大規(guī)模外泌體制備和純化來(lái)實(shí)現(xiàn)。

外泌體制備過程主要分為以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟：

1.上游生產(chǎn) —— 用于外泌體制造的細(xì)胞系的培養(yǎng)和擴(kuò)增。選擇特定的細(xì)胞系它進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)和培養(yǎng)擴(kuò)增才能產(chǎn)生大量用于外泌體生產(chǎn)的細(xì)胞。通常，規(guī)模化擴(kuò)培，可以使用生物反應(yīng)器進(jìn)行分批補(bǔ)料培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)采用無(wú)血清培養(yǎng)基可用于減少污染并有助于外泌體純化。

2.外泌體分離和純化——當(dāng)前外泌體的分離方法主要包括：差速離心法、TFF切向流過濾法、密度梯度離心、空間排阻色譜法(SEC)、聚合物沉淀和免疫親和等方法。為了提高外泌體的濃度和質(zhì)量，超速離心、微濾法、空間排阻色譜 (SEC)法 和免疫親和等技術(shù)多用于外泌體純化。

3.外泌體分析——為了清楚了解您的外泌體質(zhì)量、大小、形態(tài)、特點(diǎn)還需要對(duì)外泌體進(jìn)行進(jìn)一步分析研究，在外泌體表征一般會(huì)使用流式細(xì)胞(FACS)多色分析、凝膠電泳western blot（WB）、ELISA等標(biāo)記分析和組織學(xué)分析。外泌體質(zhì)量大小、形態(tài)分析主要使用的實(shí)驗(yàn)設(shè)備包括、納米粒度儀、透射電子顯微鏡 (TEM)、納米粒子跟蹤分析儀 (NTA)等。

4.凍干外泌體—— 雖然實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)的外泌體存儲(chǔ)條件為4℃、-20℃、-80℃。 但外泌體存儲(chǔ)在-80°C將不利于其運(yùn)輸及應(yīng)用，而采用外泌體凍干技術(shù)不僅可以在室溫條件下穩(wěn)定保存還可以改善藥物遞送載體脂質(zhì)體的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

外泌體制備過程中常用的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備：

    傳統(tǒng)的外泌體產(chǎn)生的細(xì)胞作為靜態(tài)系統(tǒng)在燒瓶中培養(yǎng)，這限制了培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)的控制和進(jìn)一步提高產(chǎn)量。所以大規(guī)模的外泌體制備或者外泌體工業(yè)化生產(chǎn)常使用動(dòng)態(tài)培養(yǎng)系統(tǒng)，比如：會(huì)使用搖瓶、旋轉(zhuǎn)瓶、滾瓶和生物反應(yīng)器作為可選的外泌體制造設(shè)備。

    由于在生物反應(yīng)器中配置了穩(wěn)定可靠的動(dòng)態(tài)監(jiān)控系統(tǒng)，可以實(shí)時(shí)控制 CO2、O2、pH 值等培養(yǎng)環(huán)境. 不僅在培養(yǎng)規(guī)模上有所擴(kuò)展，而且細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境也得到了較大的改善。尤其是微載體生物反應(yīng)器采用了提升式攪拌槳，較大程度地降低了細(xì)胞剪切力，溫控系統(tǒng)采用夾套和罐內(nèi)雙溫度PID控制控溫精準(zhǔn)度可達(dá)0.1°C。

    蘇州阿爾法生物提供生物反應(yīng)器廣泛應(yīng)用于制備外泌體的細(xì)胞規(guī)模化擴(kuò)培等外泌體制造的上游生產(chǎn)。同時(shí)提供，振蕩培養(yǎng)箱、高速離心機(jī)、低速離心機(jī)、電泳儀、電泳槽、紫外分光光度計(jì)、流式細(xì)胞儀、納米粒度儀等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備廣泛應(yīng)用于外泌體制備的各個(gè)階段