臍帶間充質干細胞分離實驗

 臍帶間充質干細胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells，UC-MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細胞，廣泛應用于組織工程，細胞治療和基因治療。 HyCyte®臍帶間充質干細胞取自滿月自然分娩的胎兒臍帶，傳代擴增至第二代凍存。本產品經生物安全檢測，無細菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，表達多種人源間質干細胞特異性標記，具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。

一、實驗目的

  驗證HyCyte®人臍帶間充質干細胞培養基對于人臍帶華通質膠中提取間質干細胞培養的能力。人體臍帶橫截面示意圖，臍帶內層覆蓋，外層為臍上皮，三個臍血管嵌在華通質膠中。華通質膠是一種凝膠狀結締組織，由富含糖胺聚糖（主要是透明質酸）、膠原纖維和肌成纖維細胞以及偶爾存在的肥大細胞的細胞外基質組成。華通質膠基質細胞在血管周圍附近最為豐富，在血管間華通質膠中變少。

二、實驗試劑和實驗耗材

試劑：人臍帶間充質干細胞培養基（Cat.No.: UCHX-G101）

間充質干細胞 其他配套試劑均為HyCyte

耗材：T175培養瓶

三、實驗步驟

(1)用無菌輔料鑷從轉運瓶中取出臍帶，置于1×PBS培養皿中。

(2)清洗臍帶，轉移至另一1×PBS培養皿中，重復 3次。

(3)將臍帶剪成4 cm左右小段，再清洗3次。

(4)去臍帶血管、羊膜，取華通膠。

(5)華通膠轉移至1個50 ml離心管中，剪碎至糜狀。

(6)T175瓶中加入40 ml人臍帶干細胞培養基。

(7)按每個T175瓶1 ml組織接種。混勻，靜置培養。

(8)靜置培養5 d以上，觀察貼壁克隆少，繼續培養。

(9)培養7 d后，觀察貼壁克隆多，加培養基培養。

(10)培養9 d后，克隆已有較大規模增殖，繼續培養。

(11)培養第10天，按1:1傳代于新 T175瓶。同時，組織轉移至新T175瓶進行二次遷移。

實驗總結

   本次實驗歷時18天，成功分離培養人臍帶間質干細胞。臍帶組織塊貼壁正常（通常臍帶組織貼壁形成克隆時間在5-10天）。觀察到貼壁細胞形態為長梭狀，邊緣明亮。在傳代中，P1 代細胞形態正常，密度均勻。此后傳代3次，無老化現象。匯合度較高時，細胞呈明顯漩渦狀極性。本產品可正常提取、培養 臍帶間質干細胞 。