質粒基因組提取實驗步驟

DNA提取是生物學實驗中常見的實驗步驟，用于分離和純化DNA以進行后續實驗分析。本文將介紹使用天根質粒 DNA 提取試劑盒進行質粒基因提取的實驗步驟。該試劑盒使用堿裂解法提取質粒DNA ，具有簡便快速、高效純化的特點。

    實驗步驟如下：

一、培養細菌并制備含有質粒的細胞懸液：

1. 從平板上挑取單克隆細菌，轉入含有3mL LB+Amp100培養基的試管中。使用含有抗生素氨芐青霉素的LB 培養基可以選擇性地培養含有質粒的細菌群體。

2. 在37℃的恒溫搖床上振蕩培養過夜，以促進細菌生長并擴增質粒。

二、收集和裂解細胞，分離并純化質粒DNA：

3. 將培養液倒入1.5 mL微量離心管中，以4000 r/min離心 2 min，使細菌沉淀。

4. 倒出培養液，使細胞沉淀盡可能干燥。

5. 加入100 μL溶液Ⅰ（ 50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris (pH 8.0)，10 mmol/L EDTA （ pH 8.0）），充分振蕩混勻，室溫放置5 min。

6. 加入200 μL溶液Ⅱ（ 0.2 mol/L NaOH，1% SDS），蓋緊管口，顛倒混勻內容物，將離心管放置冰上5 min 。

7. 加入150 μL溶液Ⅲ（ 5 mol/L乙酸鉀），蓋緊管口，顛倒數次使混勻。冰上放置5 min。

8. 以12000 r/min離心15 min，將上清轉至另一離心管中。

9. 可選擇性地加入等體積氯仿/異戊醇（24:1）進行去蛋白處理，使 DNA與蛋白質分離。反復混勻后，以10000 r/min離心10 min，將上清轉移到另一離心管中。該步驟可以根據實驗需求選擇性地進行。

10. 向上清中加入2倍體積的乙醇（約700μ L），混勻后，室溫放置15-30min。以10000 r/min離心 10 min 。倒去上清液，將離心管倒扣在吸水紙上，吸干液體。

11. 用500 μL 70% 乙醇輕輕洗滌質粒 DNA沉淀，以10000 r/min離心5min，棄去上清液，并使沉淀干燥。

12. 加入適量（20-50 μL）的無菌水，室溫使 DNA全溶解，然后將溶解的DNA在-20℃保存。

    實驗中，天根質粒DNA提取試劑盒提供了各種試劑和緩沖液，方便實驗操作和質粒 DNA的提取。這些試劑的配方經過優化和驗證，確保提取的質粒 DNA質量好、純度高。

    注意事項：

    1. 溶液Ⅱ需要新鮮配制，以確保高效的細胞裂解和DNA解鏈。

    2. 加入溶液Ⅱ后不要劇烈震蕩，以免影響DNA質量。

    3. 沉淀DNA通常使用冰冷的乙醇，加入后放置時間稍長可使DNA 沉淀全，并可用異丙醇代替乙醇，但需注意異丙醇會將鹽沉淀下來。

    4. 在DNA溶解過程中，溫度要嚴格控制，避免過高的溫度導致DNA 降解。

天根質粒DNA提取試劑盒提供了方便、快速、高純度的質粒DNA提取方法。根據實驗步驟操作，可以有效提取并純化質粒 DNA。該方法適用于大量轉化子中制備少量部分純化的質粒DNA，滿足后續實驗的需求。

蘇州阿爾法生物提供的實驗試劑主要有：

1.細胞類產品：

各種的腫瘤細胞、基因編輯細胞：比如常見的HEK293細胞、CHO細胞、骨髓干細胞、胚胎2. 天根試劑盒產品：天根系列試劑盒主要有質粒大提、質粒小提等各種質粒抽提試劑盒、血液DNA提取試劑盒、細菌DNA提取試劑盒、病毒 RNA 提取試劑盒、天根質粒DNA提取試劑盒、 植物組織DNA提取試劑盒等各種基因組提取試劑盒。還有 DH5&/TOP--10感受態等。

3.  其他試劑類：細胞培養試劑、分子生物學試劑、緩沖液、培養基、抗體、碧云天試劑等。