SH-SY5Y細胞轉染步驟

時間：2023/9/5閱讀：1248

SH-SY5Y細胞是神經(jīng)母細胞瘤細胞系中常用的模型系統(tǒng)，廣泛用于神經(jīng)生物學和神經(jīng)藥理學研究。轉染SH-SY5Y 細胞是一項重要的實驗技術，在基因功能研究、蛋白表達和定量分析等方面扮演著關鍵角色。然而，由于SH-SY5Y細胞的特殊性質(zhì)，使用傳統(tǒng)轉染方法可能會遇到一些困難。因此，本文將介紹一種優(yōu)化的SH-SY5Y 細胞轉染方法，并詳細描述每個步驟。

材料與試劑:
- SH-SY5Y細胞系：可從Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences或其他來源獲得。
- 細胞培養(yǎng)基：Dulbecco's Modified Eagle Medium（DMEM）/F12混合培養(yǎng)基。
- 熱穩(wěn)定型胰酶：用于細胞的傳代與分離。
- 轉染試劑：例如，聚乙烯亞胺（PEI）、脂質(zhì)體等。
- 目標基因的質(zhì)粒DNA或siRNA：用于轉染和表達。
- Opti-MEM：用于稀釋轉染試劑和質(zhì)粒。

SH-SY5Y細胞.jpg

優(yōu)化方法:
一、準備SH-SY5Y細胞
1. 獲得SH-SY5Y細胞系并進行培養(yǎng)。
2. 在T25細胞培養(yǎng)瓶中分別加入10 ml完整的DMEM/F12培養(yǎng)基及10%胎牛血清（FBS）。
3. 將SH-SY5Y細胞從細胞凍存管中復蘇，并將細胞傳遞至培養(yǎng)瓶中。

4. 在37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞，直至細胞達到80-90%的密度。

二、轉染前的預處理
1. 轉染前用DMEM/F12培養(yǎng)基含10% FBS對SH-SY5Y細胞進行預處理。
2. 將細胞培養(yǎng)至80-90%的密度。

3. 用1X PBS洗滌細胞2次，去除細胞內(nèi)的殘留培養(yǎng)基。

三、轉染操作
1. 根據(jù)轉染試劑的使用說明，將轉染試劑稀釋至合適的濃度，如使用PEI轉染，可在Opti-MEM中稀釋PEI至最終濃度。
2. 在另一個離心管中將質(zhì)粒DNA或siRNA按照使用的量稀釋至合適體積，并在Opti-MEM中混合均勻。
四、轉染操作步驟
1. 向細胞中加入預先稀釋好的轉染試劑，注意不要形成氣泡并避免細胞過度干擾。
2. 輕輕震蕩培養(yǎng)瓶，使轉染試劑均勻分布。
3. 將稀釋好的質(zhì)粒DNA或siRNA加入到培養(yǎng)基中，與轉染試劑充分混合，避免形成沉淀。
4. 震蕩培養(yǎng)瓶并置于37℃的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 根據(jù)研究需求，在48-72小時后進行下一步實驗（如蛋白表達、基因敲除等）。
本文詳細介紹了一種優(yōu)化的SH-SY5Y細胞轉染方法。通過合適的細胞預處理步驟，并使用適當?shù)霓D染試劑和質(zhì)粒DNA/siRNA濃度，可以實現(xiàn)高效且可重復的SH-SY5Y細胞轉染。值得指出的是，轉染條件可能因具體實驗目的而略有不同，因此每位研究者都應根據(jù)實驗需求進行適當?shù)膬?yōu)化。這種優(yōu)化后的轉染方法將有助于更好地理解SH-SY5Y細胞中的基因功能并推動神經(jīng)科學研究的發(fā)展。

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