懸浮細胞293T 和貼壁細胞293T細胞生物反應器片狀載體培養方法

 貼壁293T細胞和懸浮293T細胞在生物反應器中的高密度培養具有廣泛的應用價值。實驗中，我們使用片狀載體分別對293T貼壁細胞和懸浮293T細胞在固定床生物反應器中進行高密度培養。我們在實驗過程中采用連續灌流培養的方法，并借助片狀載體來支撐細胞的生長。通過連續觀察葡萄糖消耗，我們評估了細胞培養的增殖能力和細胞密度的變化。

實驗方法概要：

1. 需要的實驗室儀器和試劑：

   - 3.5L固定床生物反應器 x 2

   - 150g 片狀載體

   - 貼壁293T細胞

   - 懸浮293T細胞

   - DMEM培養基

   - 葡萄糖溶液

   - 無菌培養皿

   - 離心管

   - 顯微鏡

2. 貼壁293T細胞的培養：

   a. 在培養皿中加入足夠的DMEM培養基，并補充10%的胎牛血清。

   b. 將貼壁293T細胞接種在培養皿中，使其達到對數生長期。

   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養皿中解離。

   d. 離心細胞，去除上清液，用DMEM培養基洗滌細胞。

   e. 鑒定細胞數目并調整細胞濃度至2.5×107個/mL。

3. 懸浮293T細胞的培養：

   a. 在培養皿中加入足夠的DMEM培養基，并補充10%的胎牛血清。

   b. 將懸浮293T細胞接種在培養皿中，使其達到對數生長期。

   c. 用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養皿中解離。

   d. 離心細胞，去除上清液，用DMEM培養基洗滌細胞。

   e. 鑒定細胞數目并調整細胞濃度至2.3×107個/mL。

4. 固定床生物反應器的裝填：

   a. 準備2個3.5L固定床生物反應器。

   b. 在每個生物反應器中加入75g片狀載體。

   c. 用無菌操作將貼壁293T細胞接種在一個生物反應器中，將懸浮293T細胞接種在另一個生物反應器中。

5. 連續灌流培養：

   a. 連續灌流培養開始前，將生物反應器和培養基預熱至37℃。

   b. 確保培養基通過生物反應器的速度為1個床體積/小時。

   c. 每隔12小時，取出一定量的培養基樣品，用離心管離心10分鐘。

   d. 分離上清液并測定葡萄糖濃度。

   e. 根據葡萄糖消耗情況來調整培養基的流速，以維持葡萄糖濃度在合適范圍內。

   f. 持續進行連續灌流培養6天，每天觀察細胞生長情況和細胞密度的變化。

結果：

貼壁293T細胞和懸浮293T細胞均能在固定床生物反應器中生長。6天后，貼壁293T細胞的細胞密度達到2.5×107個/mL，懸浮293T細胞的細胞密度達到2.3×107個/mL，細胞的增殖約為50倍。

討論與結論：

本實驗結果表明貼壁293T細胞和懸浮293T細胞在固定床生物反應器中均能實現高密度培養。貼壁293T細胞的細胞密度稍高于懸浮293T細胞，但差異不明顯。固定床式生物反應器的連續灌流培養方法適用于兩種細胞的培養，為后續的生物工程研究提供了可行的培養工藝。該實驗方法可為進一步研究和應用貼壁和懸浮293T細胞的生物反應器培養提供參考。

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司是一家專注于提供實驗室設備、實驗耗材和實驗試劑的綜合性公司。

除了日常供應的實驗室設備主要包括：冷凍離心機、低速離心機、微量離心機、大容量離心機、 迷你離心機移液器、移液槍、Rainin移液器、 液體處理工作站、移液工作站、 磁力攪拌器、加熱攪拌器、 電動攪拌器、 恒溫攪拌器、恒速攪拌器、 多功能攪拌器、 搖床 恒溫振蕩器、 氣浴振蕩器、水浴振蕩器、 調速振蕩器、 回旋振蕩器、 漩渦振蕩器、 混勻振蕩器、 微量振蕩器、 大容量振蕩器、 多功能振蕩器、 凝膠電泳儀、電泳儀、電泳槽、 核酸純化系統、核酸提取儀、 PCR儀、 基因測序儀、 電穿孔儀、基因導入儀、 DNA合成儀、 蛋白質純化系統、 細胞融合儀、 蛋白印跡儀、 化學發光儀、流式細胞儀、生物反應器、固定床式反應器、細胞分析儀、細胞計數儀、 超凈工作臺、 生物安全柜、 發酵罐、 細胞破碎儀、 細胞生物反應器、 生化培養箱、 光照培養箱、 恒溫培養箱、 電熱培養箱、 隔水式培養箱、 CO2培養箱、 冷凍培養箱、 振蕩培養箱、 低溫培養箱、人工氣候箱、 霉菌培養箱、 培養搖床、 多功能培養箱、厭氧培養箱、 粉碎機、 破碎機、 研磨儀、球磨機、組織研磨器等核心產品。

我們還提供梅特勒瑞寧Rainin吸頭，以其穩定的和可靠性贏得了廣泛的認可。不僅如此，我們還引進了耐思Nest品牌的細胞培養耗材、PCR耗材、搖瓶、細胞工廠、離心管等豐富系列產品。這些產品采用耐用的材料和精確的制造工藝，確保了實驗的穩定性和準確性。

   此外，我們還提供天根核酸提取試劑盒、PCR Taq酶以及各種酶等生物試劑。我們的產品經過嚴格的質量控制，確保了其在實驗過程中的穩定性和可靠性。碧云天生化試劑和Biosharp生化試劑則是我們配套的實驗試劑，可滿足您在生物研究過程中的各種需求。

為了保證實驗環境的清潔與安全，我們提供了哈爵雅消毒劑系列產品，包括乙醇消毒液、異丙醇消毒液、過氧化氫消毒液、復方季銨鹽(L)消毒液、復方過氧化物消毒液等等。這些產品能夠有效地殺滅細菌和病毒，保護實驗器材和樣本的安全。

 除了耗材外，我們還提供國產CHO細胞、HEK細胞、393T細胞、腫瘤細胞株等細胞產品服務，致力于為生物領域的科學家提供解決方案。