免疫熒光技術(shù)簡(jiǎn)介

概述：

免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence technique ）又稱熒光抗體技術(shù)，它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光基團(tuán)，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位。

目的：

測(cè)定內(nèi)分泌激素、蛋白質(zhì)、多肽、核酸、神經(jīng)遞質(zhì)、受體、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面抗原、腫瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。

步驟：

1、細(xì)胞準(zhǔn)備；

2、固定。根據(jù)需要選擇適當(dāng)?shù)墓潭▌┕潭?xì)胞，固定完畢后的細(xì)胞可置于含疊氮納的PBS中4℃保存3個(gè)月；

3、通透。使用交聯(lián)劑（如多聚甲醛）固定后的細(xì)胞，一般需要在加入抗體孵育前，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行通透處理，以保證抗體能夠到達(dá)抗原部位。選擇通透劑應(yīng)充分考慮抗原蛋白的性質(zhì)。

4、封閉。使用封閉液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行封閉。

5、一抗結(jié)合。室溫孵育1h或者4℃過夜。

6、二抗結(jié)合。間接免疫熒光需要使用二抗。

7、封片，熒光顯微鏡檢查

免疫熒光技術(shù)用到的實(shí)驗(yàn)室儀器和設(shè)備：

免疫熒光技術(shù)是一種結(jié)合了免疫化學(xué)和熒光標(biāo)記技術(shù)的方法，用于在細(xì)胞或組織樣本中檢測(cè)特定的抗原或抗體。進(jìn)行免疫熒光實(shí)驗(yàn)通常需要以下實(shí)驗(yàn)室儀器和設(shè)備：

熒光顯微鏡：用于觀察和拍攝熒光標(biāo)記的樣本。

載玻片和蓋玻片：用于制作樣本切片。

顯微鏡玻片加熱器：用于固定樣本。

孵育箱：用于在特定溫度下孵育樣本和試劑。

離心機(jī)：用于離心樣本，如分離細(xì)胞或去除多余抗體。

移液器：用于準(zhǔn)確量取和轉(zhuǎn)移液體。

吸頭：與移液器配合使用，用于吸取和分配液體。

洗板機(jī)：用于自動(dòng)化洗滌步驟，減少交叉污染。

濕盒：用于在暗環(huán)境中孵育樣本。

顯微鏡載物臺(tái)加熱器：用于維持樣本溫度，尤其是在觀察活細(xì)胞時(shí)。

激光掃描共聚焦顯微鏡（可選）：用于更高級(jí)的熒光成像。

pH計(jì)：用于調(diào)整和監(jiān)測(cè)溶液的pH值。

去離子水系統(tǒng)：用于制備高純度的去離子水。

濾光片：用于選擇特定波長(zhǎng)的光。

熒光染料：用于標(biāo)記抗體或抗原。

抗體和抗原儲(chǔ)存設(shè)備：如冰箱和-80°C超低溫冰箱。

生物安全柜：用于在無菌條件下操作樣本。

熱封膜機(jī)：用于封膜顯微鏡玻片。

洗滌瓶和容器：用于存儲(chǔ)和洗滌試劑及樣本。

顯微鏡攝像頭：用于捕捉顯微鏡下的圖像。

圖像分析軟件：用于分析顯微鏡拍攝的圖像。