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            武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

            原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

            時(shí)間:2021-9-6 閱讀:242
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            一、形態(tài)學(xué)鑒定
            1. 在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征
            2. 細(xì)胞染色檢查 :
            a) 將無菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,加細(xì)胞懸液后培養(yǎng);
            b) 待細(xì)胞長滿玻片后取出,用PBS清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;
            c) 用PBS/甲醇(1:1)固定15分鐘;
            d) 棄固定液,加合適的染色液染色;
            e) 染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,
            f) 干燥后,用二甲苯透明,光學(xué)樹脂封片后觀察。


            二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定
            1. 將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片;
            2. PBS清洗標(biāo)本3次,各1 分鐘;
            3. 4%多聚甲醛固定15分鐘;
            4. 置于空氣中干燥;
            5. PBS清洗標(biāo)本3次,各2 分鐘;
            6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分鐘;
            7. PBS清洗標(biāo)本 3次 各2分鐘;
            8. 3%H2O2孵育 15分鐘;
            9. DPBS清洗標(biāo)本 3次 各2 分鐘;
            10. 封閉血清孵育(5%正常二抗血清DPBS液20分鐘)
            11. 一抗孵育,4℃ 過夜或37℃ 60 分鐘;
            12. PBS清洗標(biāo)本3次 各5 分鐘;
            13. 二抗工作液孵育(濕盒)37℃ 30 分鐘;
            14. PBS清洗標(biāo)本3次 各5 分鐘;
            15. C液(濕盒) 37℃ 30 分鐘;
            16. PBS清洗標(biāo)本3次,各5 分鐘;
            17. 用顯色液進(jìn)行顯色;
            18. 蒸餾水洗滌2次1 分鐘;
            19. 蘇木素復(fù)染1分鐘;
            20. 清水洗滌30分鐘;
            21. 光學(xué)樹脂封片后觀察。


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