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            武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

            原代肺泡上皮細胞的體外分離培養(yǎng)

            時間:2021-9-17 閱讀:618
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            PriCells
            原代肺泡上皮Primary Alveolar Epithelial Cells的體外分離培養(yǎng)
             
            1、*無血液殘留肺臟組織
            2、消化肺
            常用細胞消化酶:胰蛋白酶、彈性蛋白酶、膠原酶。
            經(jīng)支氣管將酶灌注到完整的肺中消化,或把肺組織剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。
            3、分離
            原代肺泡上皮細胞的分離純化主要方法:
            (1)密度梯度離心法:
            密度梯度離心分離細胞的原理是不同細胞的沉降系數(shù)不同,在密度梯度離心中細胞所處的位置也相應不同。 用ficoll或percoll不連續(xù)梯度離心法分離肺泡Ⅱ型上皮細胞。
            (2)濾膜分離法:
            肺泡Ⅱ型上皮細胞約10mm,比巨噬細胞(約25mm)和Ⅰ型細胞 (50mm-100mm)小,用150mm孔徑的濾膜初濾除去大的組織碎片,30mm-40mm孔徑的濾膜除去全部Ⅱ型細胞和部分巨噬細胞,采用 15mm的濾膜精濾。用濾膜分離操作簡單,它和其他分離方法聯(lián)合使用可以提高純度。
            (3)流式細胞技術法:
            根據(jù)不同細胞之間的熒光差異,用熒光物質(zhì)標記篩選。肺泡上皮細胞內(nèi)含有豐富的脂類物質(zhì),用親脂性熒光素標記,可以得到純度很高的細胞。流式技術分離細胞的產(chǎn)量很低,但純度*。這種技術經(jīng)過完善在將來會更有吸引力。
            (4)免疫黏附法:
            用IgG包被培養(yǎng)板,把肺泡上皮細胞懸液置于板上,巨噬細胞和其他大多數(shù)非肺泡上皮細胞因為含有Fc片段的受體而與IgG結合,吸附到板上,不黏附的肺泡上皮細胞被沖洗下來,簡便易行,可除去絕大多數(shù)的巨噬細胞,有效的提高肺泡上皮細胞純度。
            (5)貼壁選擇法:
            貼壁選擇原理:肺泡上皮細胞完成貼壁的時間不同,這種特性用肺泡上皮細胞培養(yǎng)時做篩選。
            總之,根據(jù)肺泡上皮細胞培養(yǎng)最終目的,綜合幾種方法能達到預期效果。

            例如:(1)先用濾膜過濾;(2)再用IgG包被法。


            4、PriCells的產(chǎn)品
            (1) 原代肺泡上皮細胞, 5×105 細胞數(shù)/1ml
            (2) 原代細胞分離試劑盒
            (3) 原代細胞分離鑒定盒
            (4) 原代上皮細胞特制基礎培養(yǎng)基
            (5) 原代上皮細胞培養(yǎng)特制添加劑


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