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            武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

            PriCells: 正常人支氣管上皮細胞培養

            時間:2021-9-28 閱讀:228
            分享:
            PriCells: 正常人支氣管上皮細胞培養
            實驗材料:
            1. 手術切除的含支氣管的正常肺組織
            2. 胰蛋白酶/EDTA液:0.05%胰蛋白酶,0.5mmol/L EDTA
            3. 6孔培養板:用多聚賴氨酸包被
            4. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS(pH=7.2),添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素,pH7.4
            5. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷
            6. 離心管(15ml、50ml)
             
            實驗方法:
            1. 將分離的兩片肺葉組織用含雙抗的1×PBS(pH=7.2)反復清洗幾次;
            2. 小心的用眼科剪將肺葉中的白色支氣管組織剪下;
            3. 再用含雙抗的1×PBS(pH=7.2)反復沖洗若干次;
            4. 將取下的支氣管組織剪成1mm3左右大小的組織塊;
            5. 用含雙抗的1×PBS(pH=7.2)反復清洗,直至清洗液清亮為止;
            6. 將組織塊轉入15ml離心管中,200rpm/min離心2min ,離心后傾去1×PBS(pH=7.2);
            7. 加入組織塊4-5倍體積的胰酶,37℃水浴中消化30min,不時震蕩;
            8. 消化完成后,200rpm/min離心2min,小心傾去消化液,再加入組織塊4-5倍體積膠原酶Ⅱ,37℃水浴中消化1h,不時震蕩;
            9. 消化完成后震蕩離心管3次,之后靜置5min,待較大的組織塊沉降至管底后,小心吸出上層懸液(如吸出的懸液中絮狀或塊狀的組織較多,可考慮過200目網篩去除),轉入另一離心管中;
            10. 1000rpm/min離心5min,傾去上層液體,加入培養基重懸細胞,轉入6孔板中,置于37℃、5%CO2的培養箱中培養。
             
            PriCells提供:
            1. 各種原代細胞特制基礎培養基;
            2. 各種原代細胞培養特制添加劑;
            3. 原代細胞分離試劑盒;
            4. 原代細胞鑒定試劑盒;
            5. 各種原代細胞DNA;
            6. 各種原代細胞RNA;
            7. 各種原代細胞蛋白質;

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