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PriCells: 正常人骨間充質干細胞的培養
PriCells: 正常人骨間充質干細胞的培養
實驗材料：
1. 骨髓來源：骨髓材料由健康人提供；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；
3. 分離液：密度為1.073g/ml的Percoll溶液；
4. DMEM-LG培養液：含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養液，補充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml；
5. 消化液：為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液；
實驗方法：
1. 由臨床醫生抽取健康人骨髓。加肝素抗凝；
2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的PBS混合，用吸管吹打分散細胞。在室溫下離心（900g，10min）。棄上清液；
3. 加入PBS懸浮細胞，調節細胞密度至4×107個/ml；
4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液，再將5ml細胞懸液鋪于其上。離心（900g，30min）；
5. 收集界面上的細胞，加入DMEM-LG培養液清洗。離心，收集細胞；
6. 用DMEM-LG培養液重新懸浮細胞，計數細胞，調節細胞密度；
7. 將細胞以1.6×105個/cm2的密度接種于培養瓶中。在37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養箱中培養。48h后換液，以后每3—4d換液1次；
8. 當培養的細胞相互匯合達到90%的生長表面時，用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細胞。進行繼代培養；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養基；
2. 各種原代細胞培養特制添加劑；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒；
5. 原代細胞總蛋白質抽提物；
6. 原代細胞總RNA；
7. 原代細胞總DNA；