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PriCells: 正常視網膜米勒細胞原代培養
PriCells: 正常視網膜米勒細胞原代培養
實驗材料：
1. 材料來源：人眼、兔眼或者豬眼等；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶-100IU/ml透明質酸酶混合消化液；
4. 消毒無菌的手術器械若干；
實驗方法：
1. 取材
（1）取自人的供體眼球；
1） 經常規消毒程序消毒后，于鋸齒緣后約1mm處環形切開眼球，去除前段及玻璃體；
2） 用無齒小鑷子輕輕剝取視網膜組織，并用眼科小剪子剪去視乳頭周圍的視網膜及血管；
3） 用PBS液稍洗，去除黏附的色素上皮細胞。置于盛有平衡鹽溶液的培養皿中；
（2）取自兔的供體眼球：當取出視網膜組織后，在解剖顯微鏡下用眼科小剪刀剪去髓放線部分及血管；
2. 原代培養；
1） 在處理完畢的視網膜組織中加入胰蛋白酶和透明質酸酶混合消化液，于37℃調間隙消化30min；
2） 用有血清培養液終止消化。經吹打后，將細胞懸液離心（800r/min）5min；
3） 用培養液重新懸浮細胞，并吸走絮狀的纖維樣物質；
4） 按4×104～6×104個細胞/ml的密度進行接種；
5） 以常規方法培養。24h后取出培養瓶，置換培養液，以去除沒有貼壁的其它細胞；
6） 每周換液2次，在細胞分裂增長至基本融合成單層時傳代；
PriCells提供：
1. 各種原代細胞特制基礎培養基；
2. 各種原代細胞培養特制添加劑；
3. 原代細胞分離試劑盒；
4. 原代細胞鑒定試劑盒；
5. 原代細胞總蛋白質抽提物；
6. 原代細胞總RNA；
7. 原代細胞總DNA；