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PriCells: 原代細(xì)胞甲基綠-哌咯寧法顯示DNA和RNA
PriCells: 原代細(xì)胞甲基綠-哌咯寧法顯示DNA和RNA
基本原理：
甲基綠（methyl green）和哌咯寧（pyronin）均為堿性染料，因此可與帶負(fù)電荷的磷酸根形成鹽。甲基綠分子有2個(gè)正電荷，易與雙鏈DNA分子結(jié)合使原代細(xì)胞核內(nèi)的DNA呈藍(lán)綠色。哌咯寧分子有一個(gè)正電荷，易與單鏈RNA分子結(jié)合使原代細(xì)胞質(zhì)和核仁內(nèi)的RNA顯示紅色。也有人認(rèn)為染色原理與核酸分子的空間構(gòu)型有關(guān)。
配制試劑：
1. 0.2mol/L pH4.8的乙酸緩沖液的配制
將1.2ml冰乙酸加蒸餾水定容至100ml，在使用時(shí)再加2.72g乙酸鈉（NaAc·3H2O），待*溶解后，即可使用；
2. 甲基綠-哌咯寧染色液配制
A液：取2g甲基綠加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸緩沖液中即可；
B液：取1g哌咯寧加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸緩沖液中即可；
用時(shí)將A、B液按5：2混合即可；
染色步驟：
1. 取培養(yǎng)于蓋玻片上的貼壁原代細(xì)胞，用Hanks液漂洗三次；
2. 70%乙醇溶液固定10min，取出后晾干；
3. 滴加甲基綠-哌咯寧染色液覆蓋蓋片樣品，染色15min；
4. 蒸餾水沖洗3次；
5. 95%乙醇分色，晾干；
6. 用二甲苯透明，用光學(xué)樹膠封片后觀察；
結(jié)果：
原代細(xì)胞核因含DNA呈綠色，細(xì)胞質(zhì)及核仁因含RNA呈紅色；