PriCells: 正常人羊膜細(xì)胞（HAM）原代細(xì)胞培養(yǎng)                                                                       PDF下載

實(shí)驗(yàn)材料：
1. 人胎盤；
2. PBSA/GASP：含抗生素的PBSA（慶大霉素，50μg/ml；兩性霉素B，1.25μg/ml；鏈霉素100μg/ml；青霉素100U/ml）；
3. 丙三醇；
4. 含50%丙三醇的DMEM；
5. 胰蛋白酶/EDTA；
6. Millicell微孔膜組織培養(yǎng)插片；
7. 塑料刮片和無菌棉拭子；

實(shí)驗(yàn)方法：
1. 用PBSA/GASP清洗組織；
2. 分離人羊膜，用戴手套的手從胎盤上將羊膜鈍性分離下來，分離出的羊膜薄層包括上皮細(xì)胞，基底膜和一些基質(zhì)組織；
3. 用無菌棉拭子除去基底膜下的基質(zhì)組織，使分離的羊膜盡可能的薄；
4. 在監(jiān)測(cè)供者血清以除外疾病的時(shí)期，可以將粗分離出的人羊膜保存在含有50%丙三醇的DMEM中，-70℃存放；
5. 臨用前解凍人羊膜，用PBSA清洗后將其切成直徑約為2mm的小塊；
6. 用胰蛋白酶/EDTA消化組織塊，37℃，30min；
7. 用塑料刮片輕刮消化過的人羊膜，除去上皮細(xì)胞，注意不要破壞基底膜；
8. 用PBSA清洗裸露的羊膜，并將它的基底膜面（去除上皮細(xì)胞的面）黏附在Millicell微孔膜組織培養(yǎng)插片上；