PriCells: 正常角膜緣干細(xì)胞的免疫染色     

試劑和材料：
1. 一抗：
（1） ABCG2-----------------小鼠單克隆BXP-21---------1：100
（2） 連接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1：100
（3） 細(xì)胞角蛋白3（K3）-----小鼠單克隆AE5----------- 1：500
（4） 細(xì)胞角蛋白12（K12）---兔多克隆J7-------------- 1：200
2. 二抗；
（1） 抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500
（2） 抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500
3. 封閉抗體：PBSA配制的10%熱滅活羊血清；
4. Trion X-100；
5. PBSA；
6. 多聚甲醛（PFA），將16%原液用PBSA現(xiàn)配成4%的工作濃度；
7. Immu-Mount防褪色封片劑；
8. 載玻片和#1蓋玻片；
9. 共聚焦顯微鏡；

實驗方法：
1. 培養(yǎng)在塑料平皿或羊膜上的細(xì)胞；
2. CMF-Saline G洗一遍；
3. 用新鮮配制的4% PFA室溫固定15min；
4. PBSA洗一遍；
5. 0.1% Triton X-100破膜10min；
6. 樣本與一抗室溫孵育1h；
7. PBSA洗2遍；
8. 加入二抗室溫孵育1h；
9. 用PBSA洗2遍；
10. #1蓋玻片，用最小體積的防褪色的封片劑封片；
11. 在熒光或共聚焦顯微鏡下用40×油鏡對樣本進(jìn)行觀察；