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            武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

            PriCells: 從臍靜脈分離干細胞

            時間:2021-10-28 閱讀:217
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            PriCells: 從臍靜脈分離干細胞                                                                                  


            試劑和材料:
            1. 培養基:*LG-DMEM:含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,添加10%熱滅活胎牛血清,100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素;
            2. PBSA;
            3. 胰蛋白酶,0.05%,含EDTA;
            4. 膠原酶A,0.1%用PBSA配制;
            5. 培養瓶;
            6. 導管;


            實驗方法:
            1. 在正常分娩后6-12h內收集和處理臍帶;
            2. 在臍靜脈內插入導管,用PBSA*地洗2次;
            3. 夾住遠端臍帶;
            4. 用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈;
            5. 夾住近端臍帶;
            6. 將臍帶在37℃孵育20min;
            7. 輕輕按摩臍帶,收集含有內皮和內皮下層細胞的懸浮液,600g離心10min;
            8. 用培養基重懸細胞;
            9. 計數后,按1×103個細胞/cm2的密度將細胞接種到75cm2的培養瓶中;
            10. 3天后更換培養基,除去未貼壁細胞,保留貼壁的細胞繼續生長,每3天更換一次新鮮培養基,至大約2周后可見成纖維樣細胞生長;
            11. 在這種情況下,用0.25%胰蛋白酶/EDTA收集細胞,傳代到新培養瓶中繼續擴增;

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