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            武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

            PriCells: 飼養(yǎng)層細胞共培養(yǎng)體外擴增原代CD34+細胞

            時間:2021-11-1 閱讀:286
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            PriCells: 飼養(yǎng)層細胞共培養(yǎng)體外擴增原代CD34+細胞                                            


            試劑和材料:
            1. MSCs培養(yǎng)基;
            2. 6孔培養(yǎng)板;
            3. 絲lie霉素C,100μg/ml;
            4. 共培養(yǎng)的培養(yǎng)基:IMDM添加10%FBS,100U/ml青霉素和100μl/ml鏈霉素;
            5. 細胞因子(干細胞因子,IL-6,F(xiàn)lt-3配體,促血小板生成素);


            實驗方法:
            1. 將臍帶血來源的間充質(zhì)干細胞(CB-MSCs)作為飼養(yǎng)層細胞,用MSCs培養(yǎng)基重懸CB-MSCs,細胞濃度為5×104個細胞/ml;
            2. 將CB-MNCs接種到6孔板;
            3. 每周兩次半量更換新鮮培養(yǎng)基;
            4. 當CB-MNCs達到90%以上匯合時,用10μg/ml絲lie霉素C處理,37℃ 2.5h;
            5. 用無血清IMDM將CB-MNCs洗兩遍;
            6. 按1×104/ml CD34+細胞重懸于含細胞因子的共同培養(yǎng)基(100ng/ml干細胞因子,100ng/ml IL-6,50ng/ml Flt-3配體,10ng/ml促血小板生成素);
            7. 將CD34+細胞接種到CB-MSCs飼養(yǎng)層細胞上;
            8. 每周兩次更換1/4培養(yǎng)基;
            9. 2周后,收集未貼壁細胞;

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