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            武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

            PriCells: 原代細胞培養后過氧化物酶檢測

            時間:2021-11-8 閱讀:311
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            PriCells: 原代細胞培養后過氧化物酶檢測                                                                   


            試劑和器材: 
            1. 過氧化物儲存液:30mmol/L過氧化氫儲存在T-牛血清白蛋白(Tris-牛血清白蛋白溶液)中;
            2. 樣品緩沖液:2體積的T-牛血清白蛋白溶液+1體積的2%(體積分數)Triton X-100;
            3. 鈦氧硫化物(2.25g/L)溶于1mol/L硫酸中;
            4. T-牛血清白蛋白:20mmol/L的Tris-HCl(pH7.0),含1g/L牛血清白蛋白;
            5. 微量離心機,帶2.0ml微量離心管;
            6. 分光光度計;


            實驗方法:
               原代細胞培養后,所有操作都在2ml微量離心管中,置于冰上進行,所有溶液也保持在冰浴環境下。
            1. 新鮮制備待測混合物,將8.5ml過氧化物儲存液用T-牛血清白蛋白溶液稀釋至100ml;
            2. 向0.5ml測定混合物中加入1.0ml鈦氧硫化物,在405nm波長下測定吸光度,應該約為1.5.如果不是,就相應地調整過氧化氫的濃度;
            3. 將10μl樣品與30μl樣品緩沖液相混合,反應對照液使用40μl樣品緩沖液;
            4. 所有管子中都加入0.5ml待測混合物,每批只操作6管;
            5. 準確計時1min后,加入1.0ml的鈦氧硫化合物,用微量離心機以13500g離心2min;
            6. 所有管都在室溫達到平衡后在405nm波長處測量吸光度,空白樣含有0.54ml T-牛血清白蛋白和1ml鈦氧硫化合物;


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