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            細胞學堂 | RAW 264.7誘導極化及鑒定大全

            時間:2023-2-3 閱讀:3097
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            RAW 264.7(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞)是破骨細胞、炎癥研究最-常用的體外模型之一,被廣泛用于研究風濕性關節炎、骨質疏松癥、骨質溶解、牙周炎等骨骼疾病。


            極化方式


            巨噬細胞是具有異質性的一類免疫細胞,在體內外不同環境影響下可極化為不同表型參與機體生理、病理反應。從激活方式上分為經典激活的巨噬細胞M1選擇性激活的巨噬細胞M2


            1

            M1型分化

            細菌和脂多糖(LPS)可以誘導巨噬細胞向M1型分化,產生促炎細胞因子,抵抗病原入侵,但也會造成機體損傷,在實驗中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時誘導其極化


            640.png

            圖1. a.RAW 264.7 未分化形態圖 b.RAW 264.7 M1型分化形態圖




            2

            M2型分化

            白細胞介素(IL-4)可以誘導巨噬細胞向M2型分化,分泌抗炎細胞因子,并在組織修復與重建和腫瘤的形成過程中發揮作用,在實驗中可采用10ng/mL IL-4作用12小時誘導其極化


            圖2. RAW 264.7 不同分型形態圖



            鑒定方法


            M1、M2具有各自特征性標志分子,iNOS、CD86、TNF-α是常見的M1型巨噬細胞的標志分子,IL-10、Arg-1、CD206是常見的M2型巨噬細胞標志分子。一般在實驗研究中:

            1

            WB可以分析RAW264.7細胞iNOS、YM-1和Arg-1的表達水平(如圖3);


            圖3. WB分析照射對IL-4誘導的RAW264.7細胞YM-1和Arg-1的表達影響

            2

            流式細胞術(FCM)可以分析RAW264.7細胞表面CD86和CD206的表達(如圖4);


            640 (2).png

            圖4. 流式細胞術分析照射對IL-4誘導的小鼠RAW264.7細胞CD206和CD209的表達

            3

            實時定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細胞因子的表達及分泌(如圖5);


            640 (3).png

            圖5. 用于實時熒光定量PCR的引物序列

            4

            Griess reagent 可以分析細胞培養上清 NO 生成(如圖6)。


            圖6. 不同樣品對RAW 264.7中NO產生的影響


            參考文獻


            [1] 羅進芳, 朱瑞麗, 易浪,等. 青藤堿對LPS、IL-4誘導的小鼠RAW264.7巨噬細胞極化的影響[J]. 中國免疫學雜志, 2015, 31(1):5.

            [2] 陳濤, 梁瀟, 賀明,等. RAW264.7細胞M1/M2亞型的誘導和鑒定[J]. 中國分子心臟病學雜志, 2011(2):4.

            [3] 解海榮, 李貞, 李海亮 ,等. 不同照射方式對IL-4誘導的小鼠RAW264.7細胞極化的影響. 中國輻射衛生, 2017, 26(6): 637-641.

            [4] Li C, Du Y, Lv H, et al. Injectable Amphipathic Artesunate Prodrug-Hydrogel Microsphere as Gene/Drug Nano-Microplex for Rheumatoid Arthritis Therapy[J]. Adv. Funct. Mater. 2022, 32, 2206261.

            [5]  Li P ,  Hao Z ,  Wu J , et al. Comparative Proteomic Analysis of Polarized Human THP-1 and Mouse RAW264.7 Macrophages[J]. Frontiers in Immunology, 2021, 12:700009.

            [6] Ji-Eun Lee, Jae Hoon Lee, Byungrok Min,et al. Immunostimulatory effect of egg yolk phosvitin phosphopeptides produced by high-temperature and mild-pressure pretreatment and enzyme combinations in RAW 264.7 cells via TLR2/MAPK signaling pathway[J].Journal of Functional Foods,Volume 98,2022,105264.



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