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細(xì)胞學(xué)堂 | 從傳代到換液，養(yǎng)好22RV1
22RV1是來自異種移植(在閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴型CWR22嫁接后復(fù)發(fā)的小鼠中連續(xù)傳代)的人前列腺癌上皮細(xì)胞系[1]。此細(xì)胞系表達(dá)前列腺特異抗原PSA。二羥基睪丸脂酮可輕微刺激細(xì)胞生長，經(jīng)Western Blot檢測(cè)溶解產(chǎn)物與抗雄性激素受體抗體起免疫反應(yīng)。EGF可刺激細(xì)胞生長，但TGFβ-1不能抑制細(xì)胞生長。該細(xì)胞在裸鼠中成瘤。近年來，研究表明22RV1產(chǎn)生高滴度的人類逆轉(zhuǎn)錄病毒XMRV(異嗜性小鼠白血病病毒相關(guān)病毒)。
細(xì)胞特性
形態(tài) | 上皮樣細(xì)胞單層貼壁生長 |
倍增時(shí)間 | ~40 hours |
抗原表達(dá) | 前列腺特異性抗原（PSA） |
表達(dá)標(biāo)志物 | 雄激素受體 |
生長培養(yǎng)基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
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培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1 | 該細(xì)胞有密度依賴，傳代比例不宜超過1：4； |
2 | 細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)需要離心去除DMSO，離心接入皿中，靜置兩天，保持培養(yǎng)箱環(huán)境穩(wěn)定。凍存細(xì)胞復(fù)蘇最初階段，貼壁量少，成簇松散貼壁，但是最終細(xì)胞會(huì)變平，并且擴(kuò)散成很好的單層，這個(gè)過程需要4-5天時(shí)間； |
3 4 | 細(xì)胞凍存后復(fù)蘇成活率不高，推薦凍存液配比為90%血清+10% DMSO； 細(xì)胞生長緩慢，細(xì)胞只能生長到90%的匯合度。 |
傳代步驟
1
吸出原培養(yǎng)液；
2
加入2mL左右PBS，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄；
3
加入1mL左右胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤所有細(xì)胞；
4
放入培養(yǎng)箱消化，消化2- 3分鐘左右，顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯分離變圓且自然脫落（細(xì)胞一定要徹-底消化下來，全程不要拍打培養(yǎng)瓶）；
5
加入3mL含血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕/反復(fù)吹打細(xì)胞，在顯微鏡下觀察，細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液；；
6
收集細(xì)胞懸液離心，1000-1200rpm（250-300g）/min，3-5分鐘，離心完吸出上清丟棄；
7
加入新鮮培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足足量培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)；
8
檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。
吸出舊培養(yǎng)基并沿培養(yǎng)瓶側(cè)邊（非培養(yǎng)細(xì)胞容器底部）添加新的培養(yǎng)基；
每2-3天換液一次；
傳代比例和頻次
細(xì)胞長滿80%后，按照1：2的比例傳代，2-3天可再次生長到80%；1：3傳代，再次長滿到80%需要3天以上的時(shí)間。
細(xì)胞正常生長圖片
ATCC圖片
[1] Sramkoski RM, Pretlow TG 2nd, Giaconia JM, Pretlow TP, Schwartz S, Sy MS, Marengo SR, Rhim JS, Zhang D, Jacobberger JW. A new human prostate carcinoma cell line, 22Rv1. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1999 Jul-Aug;35(7):403-9. doi: 10.1007/s11626-999-0115-4. PMID: 10462204.
[2] Knouf EC, Metzger MJ, Mitchell PS, Arroyo JD, Chevillet JR, Tewari M, Miller AD. Multiple integrated copies and high-level production of the human retrovirus XMRV (xenotropic murine leukemia virus-related virus) from 22Rv1 prostate carcinoma cells. J Virol. 2009 Jul;83(14):7353-6. doi: 10.1128/JVI.00546-09. Epub 2009 Apr 29. PMID: 19403664; PMCID: PMC2704771.
