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細胞學堂 | 培養B16系列細胞必看知識點
B16系列細胞屬于小鼠黑色素瘤細胞系，是源自C57小鼠的一種皮膚癌細胞，常用于腫瘤生物學研究。
本期細胞學堂為大家整理了B16系列細胞的培養方法與注意事項，B16細胞黑色素的形成原因及解決方法，幫助您快速上手開展實驗。
01
B16系列細胞培養方法
培養條件
RPMI-1640(PM150110)＋10%FBS(164210-50)＋1%P/S(PB180120)；
生長特性
貼壁生長，生長迅速，能產生黑色素；
傳代方式
0.25%含EDTA的胰蛋白酶消化2-3min，推薦傳代比例1:3-1:4；
凍存
推薦凍存密度1-5×106cell/ml。
注意事項
（1）細胞生長速度快，培養密度不宜過高，需要及時傳代和換液，細胞密度過高，會導致細胞狀態變差，死亡；
（2）細胞內含黑色素，在細胞會產生黑色素，遇到培養基顏色變深，消化下來的細胞離心后，沉淀為黑褐色或者是灰黑色，此為正常現象。
復蘇時細胞沉淀顏色:“灰黑色"（1640培養基）
細胞產黑色素導致培養基變色（1640培養基）
細胞產黑色素導致培養基變色（DMEM培養基）
02
黑色素形成原因
該細胞在體外培養有兩種培養條件：快速分裂增殖和分化成熟，培養基條件不同可改變該細胞的生長狀態，使用RPMI-1640培養基可使其快速增殖，而使用DMEM培養基能誘導細胞分化成熟并合成黑色素。建議正常擴增凍存請使用RPMI-1640培養基，若需要進行分泌黑色素等后續相關實驗，可以在擴增凍存細胞后更換為DMEM培養來滿足實驗設計。
需要注意的是，B16細胞對培養基條件較為敏感，同樣是DMEM或RPMI-1640培養基，不同型號、不同廠家的產品，其具體成分的少許差異都有可能改變B16系列細胞的生長狀態。在實驗時應慎重選擇培養基，培養時最好是保持和購買細胞的廠家同一型號的培養基，以保證細胞的性狀穩定。
更換培養條件，比如由RPMI-1640更換成DMEM會導致黑色素大量形成，細胞培養基變黑，但若穩定培養時未更換培養基，出現培養基突然變黑的情況，有可能是以下幾個原因引起的：
1
細胞死亡
如果細胞在培養過程中出現大量細胞死亡，細胞的代謝產物和細胞碎片可能會導致培養基變黑。這可能是由于細胞因狀態變差、污染或其他因素引起的。
2
細胞污染
如果培養基中出現污染（細菌、真菌、支原體、黑膠蟲等），這些微生物的生長和代謝產物可能導致培養基變黑。
03
客戶B16-F10細胞實驗經驗分享
(以下為客戶實戰經驗分享，僅做參考)
01
為了保證B16-F10細胞的活性，通常在傳代時盡可能控制胰酶的溫度及消化時間，關注B16-F10細胞的消化狀態（顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓，側立培養瓶細胞可以滑落時可終止消化）。消化過度導致B16-F10細胞損傷、活性下降。尤其是在進行黑色素合成、分泌和酪氨酸酶活性等相關實驗時，更需注意胰酶的消化時間，細胞的消化狀態。
02
使用光線對B16-F10細胞進行輻照處理時，有兩點值得關注的地方：
（1）光照時須打開培養皿蓋，以確保光線照射在B16-F10細胞上，而非被培養皿蓋折射與吸收；
（2）輻照前，需要將培養基換成無酚紅的RPMI-1640完-全培養基。避免酚紅對光線的吸收作用，影響試驗結果。
04
B16系列細胞的常見應用
1
黑色素瘤生物學研究
B16細胞系可以用于黑色素瘤的發生、發展和轉移機制的研究。通過模擬黑色素瘤細胞在體內的行為，探索細胞增殖、遷移、侵襲、轉移等過程。
2
腫瘤藥物篩選
B16細胞在體外培養中可以用于篩選和評估抗黑色素瘤藥物的療效。通過將藥物添加到培養基中，研究藥物對細胞增殖、凋亡、侵襲、轉移等生物學行為的影響，以評估其抗腫瘤活性。
3
免疫治療研究
B16細胞可以用作免疫治療研究的模型。例如，可以將免疫刺激劑或免疫檢查點抑制劑添加到培養基中，研究它們對細胞免疫應答和腫瘤生長的影響，以評估其在黑色素瘤治療中的潛力。
4
黑色素瘤轉移研究
B16細胞的轉移能力是其研究的重要方面。可以通過將細胞注射到小鼠的血液循環或特定的器官中，研究黑色素瘤細胞的遷移和轉移機制，以及針對轉移的治療策略。
5
細胞信號傳導研究
B16細胞可以用于研究細胞信號傳導通路在黑色素瘤發生和發展中的作用。例如，可以通過轉染或抑制特定的信號分子或途徑，研究其對細胞增殖、凋亡、侵襲等生物學行為的影響。
注意：
B16系列細胞雖然在黑色素瘤研究中被廣泛使用，但其在體外培養中仍然存在一些局限性，如與體內環境的差異、細胞株的異質性等。因此，在研究中需要綜合使用其他模型和方法，以更好地模擬和了解黑色素瘤的生物學特性。
●參考文獻●
