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神經(jīng)科學(xué)研究新工具：干粉培養(yǎng)基在Neuro-2a細(xì)胞分化中的應(yīng)用實(shí)測(cè)
Neurobasal-A神經(jīng)元干粉培養(yǎng)基一種專為神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，適用于新生和成年腦神經(jīng)元的長(zhǎng)期維持和成熟，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域?。Neurobasal-A神經(jīng)元干粉培養(yǎng)基適用于大多數(shù)神經(jīng)元細(xì)胞應(yīng)用，特別是新生和成體腦神經(jīng)元的長(zhǎng)期維持和成熟。它可以在不添加膠質(zhì)細(xì)胞飼養(yǎng)層的情況下，長(zhǎng)期和短期地維持神經(jīng)細(xì)胞的同源群落的存活。
Neurobasal-A神經(jīng)元干粉培養(yǎng)基成分說(shuō)明
Neurobasal-A神經(jīng)元干粉培養(yǎng)基配置方法
| 形態(tài) | 粉末 |
| L-谷氨酰胺 | 無(wú) |
| D-葡萄糖 | 4500 mg/L |
| 丙酮酸鈉 | 25 mg/L |
| HEPES緩沖劑 | 2600 mg/L |
| 酚紅指示劑 | 8.1mg/L |
| 儲(chǔ)存條件 | 2-8℃ 密閉、避光 |
| 運(yùn)輸條件 | 常溫 |
| 有效期 | 36個(gè)月 |
1. 配制用水應(yīng)使用純化水、超純水或注射用水，配制過(guò)程中水溫應(yīng)控制在20-30℃。
2. 于配制容器中加入90%配制體積的配制用水（如需配制1 L則這里加900 mL配制用水），開(kāi)啟培養(yǎng)基配制容器的混合系統(tǒng)（建議混合系統(tǒng)單位體積輸入功率大于10 W/m3），充分?jǐn)嚢瑁瑪嚢钑r(shí)應(yīng)避免氣泡的產(chǎn)生。
3. 根據(jù)所需配制體積，計(jì)算所需粉末質(zhì)量，按照12.92 g/L比例稱取粉末培養(yǎng)基（如需配制1 L則需稱取12.92 g粉末）。將準(zhǔn)確稱的培養(yǎng)基干粉加入到步驟【2】的配制容器中，充分?jǐn)嚢?0 min以上，直至粉末完-全溶解；
4. 待溶液完-全澄清后，根據(jù)配制體積，按照2.2 g/L比例稱取碳酸氫鈉（分析純）粉末，緩慢加入到步驟【3】的溶液中，繼續(xù)攪拌5-10 min至溶解；
5. 加配制用水將完-全溶解的步驟【4】溶液精確定容至100%配制體積（如需配制1 L則定容至1 L）。
6. 測(cè)量pH值，必要時(shí)用1 mol/L氫氧-化鈉溶液或1 mol/L鹽酸溶液調(diào)整pH值至7.20-7.30；由于過(guò)濾會(huì)使培養(yǎng)基pH值稍微偏高，因此此處比目的pH值（7.20-7.40）要低一些。
7. 用孔徑為0.2 μm的濾膜正壓過(guò)濾除菌（注意無(wú)菌操作）。
8. 過(guò)濾結(jié)束可以取少許液體培養(yǎng)基進(jìn)行菌檢，待合格后再使用。
9. 過(guò)濾后的培養(yǎng)基液體應(yīng)立即使用或存放于玻璃瓶、培養(yǎng)基瓶（PET）或具有隔氧涂層的一次性儲(chǔ)液袋中，2-8℃避光保存，此時(shí)液體培養(yǎng)基保質(zhì)期為1年。
Neurobasal-A神經(jīng)元干粉培養(yǎng)基注意事項(xiàng)
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套及口罩操作；
2. 為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果，請(qǐng)務(wù)必按照建議的儲(chǔ)存條件進(jìn)行保存；
3. 產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進(jìn)一步生產(chǎn)使用，不可用于臨床診斷或治療。
Neurobasal-A神經(jīng)元干粉培養(yǎng)基常見(jiàn)問(wèn)題
Q：?jiǎn)为?dú)的 Neurobasal-A培養(yǎng)基或添加了 B-27 添加劑的 Neurobasal 培養(yǎng)基能否冷凍以延長(zhǎng)產(chǎn)品保質(zhì)期？
A：不建議冷凍培養(yǎng)基，因?yàn)榻鈨鰰r(shí)可能會(huì)形成沉淀；配方中的無(wú)機(jī)鹽和氨基酸在溫度波動(dòng)時(shí)可能會(huì)從溶液中析出，這些沉淀一旦形成，就不容易再回到溶液中。
Q：我可以添加什么補(bǔ)充劑到Neurobasal-A培養(yǎng)基中來(lái)培養(yǎng)我的神經(jīng)細(xì)胞？A：可以添加B-27補(bǔ)充劑（不含維A，PB180638）來(lái)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞；培養(yǎng)海馬神經(jīng)元和其他神經(jīng)元細(xì)胞可添加B-27(含維A，PB180637）或N-2添加劑（PB180641)；用于原代膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、星型膠質(zhì)表型的腫瘤細(xì)胞系（星形膠質(zhì)細(xì)胞和膠質(zhì)瘤）的培養(yǎng)，可以使用G-5添加劑（PB180640）。
Q：Neurobasal-A干粉培養(yǎng)基制備液體培養(yǎng)基過(guò)程中需要控溫多少呢？
A：溶解的溫度控制在室溫即可也就是20-30℃。
Q：Neurobasal-A干粉培養(yǎng)基為什么要額外添加碳酸氫鈉，不能提前加在干粉里配制時(shí)直接溶解嗎？
A：細(xì)胞培養(yǎng)基中的碳酸氫鈉（NaHCO3）通常并不包含在干粉形式的培養(yǎng)基內(nèi)，而是作為單獨(dú)的成分，在配制培養(yǎng)基溶液的過(guò)程中另外添加。主要原因包括：1. 碳酸氫鈉在一定條件下容易分解，并且對(duì)二氧化碳敏感，如果預(yù)先混入干粉培養(yǎng)基中，可能會(huì)影響其穩(wěn)定性并導(dǎo)致有效成分失效。2. 由于不同實(shí)驗(yàn)室的二氧化碳濃度以及操作者配制時(shí)的具體條件（例如溫度、時(shí)間）可能不同，因此在最終配制液體培養(yǎng)基時(shí)才加入碳酸氫鈉，可以根據(jù)實(shí)際需求調(diào)整其濃度，以確保培養(yǎng)基達(dá)到理想的pH值。3. 將碳酸氫鈉獨(dú)立存儲(chǔ)還可以方便運(yùn)輸和長(zhǎng)期儲(chǔ)存干粉培養(yǎng)基，因?yàn)樘妓釟溻c受潮后可能引起結(jié)塊，影響其溶解性能。