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            人臍靜脈內皮細胞的操作流程說明

            閱讀:1341      發布時間:2022-11-16
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                臍靜脈內皮細胞是一種來源于臍帶組織的干細胞,它是臍靜脈的重要組成細胞之一,理論上能夠進行無限的傳代,所以進行細胞實驗的時候,常選擇人臍靜脈內皮細胞。
              人臍靜脈內皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC),常作為內皮細胞功能和病理學的研究模型,應用于血管生成、愈合、血管建模、組織工程、炎癥、腫瘤等研究中。
              人臍靜脈內皮細胞的操作流程:
              1.產科無菌取臍帶1根,置于含保鮮液的廣口試劑瓶中4℃保存(避免污染),在最短的時間內,將臍帶攜入實驗室,進行以下操作。
              2.在超凈工作臺或無菌層流工作臺上,將臍帶用D-Hank溶液清洗干凈,將靜脈插管插入臍靜脈中,并用絲線結扎、固定。
              3.用20ml注射器將37℃的D-Hanks溶液注入臍靜脈,反復沖洗至清洗液無色澄清為止。
              4.用血管鉗夾住臍靜脈的另一端,并將0.2%的Ⅰ型或Ⅱ型膠原酶(約20ml)通過靜脈插管注入臍靜脈中,至臍靜脈充盈為止(排掉靜脈管中的空氣)。
              5.將臍帶放置在盛有37℃水的玻璃燒杯中,在37°C水浴條件下消化約20min(每5min抽吸/注入1次)。
              6.當酶液變成混濁時(在顯微鏡下可見大量游離細胞),將酶液在臍靜脈中反復抽吸沖打3次后,吸出并置于50ml離心管中。
              7.細胞懸液經350g離心5min后,棄去上清液,并用D-Hanks溶液清洗2次,然后再以350g離心5min。
              8.棄去上清液,將細胞溶于8ml內皮細胞培養液(M l99 80ml、FBS 20ml、PS 1ml、L-Gln 2mM、ECGS 10mg/100ml、Heparan 4000U/1 00ml、Insulin mu/100ml)中,接種于預先包被2%明膠的T25培養瓶中。
              9.細胞培養在37℃、5%CO2培養箱中,24h后換液,棄掉未貼壁細胞。之后每2~3d換液1次,待細胞匯合時消化傳代。

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