小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）的培養要點及高效轉染試劑

時間：2021/7/13閱讀：9815

小鼠單核巨噬細胞白血病細胞（RAW264.7）是通過Abelson鼠白血病病毒誘導BALB/c小鼠產生腫瘤后得到的細胞株。其在醫學研究中應用十分普遍，是許多白血病相關研究模型的常用細胞株，在微生物學、免疫學等研究中也十分常用。但RAW264.7細胞形態和分化狀態多變，在實際培養中較難把握，給科研工作帶來了一定困難；且RAW264.7細胞很難轉染，許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉不進去，或者僅有不到10%的轉染效率。因此RAW264.7細胞的培養及轉染方法就很值得去探討，本文就這些方面進行介紹，以供科研工作者借鑒。

一、RAW264.7細胞的形態特征

很多人養RAW264.7細胞時發現自己的細胞出現偽足；就連ATCC的描述也稱RAW264.7細胞形態多樣，可有圓形、類圓形，以及長出偽足的長梭形、多邊形，可單核可多核。而實際，有偽足的情況是RAW264.7細胞受到外界刺激進行了分化，是細胞衰老、分化的表現；RAW264.7細胞的“最佳"形態應是較小的單核圓形細胞。

二、RAW264.7細胞的培養條件

RAW264.7細胞的培養環境與一般貼壁細胞并無差異。即培養箱溫度為37℃，CO2濃度為5%。ATCC推薦的培養基為DMEM+10%的胎牛血清；實際上，經研究者們實驗發現高糖型DMEM培養的RAW264.7細胞傳代后貼壁更快、細胞生長速度更快。因此，推薦使用高糖型DMEM，FBS濃度為10%，作為RAW264.7細胞的培養基。

三、RAW264.7細胞的傳代

關于RAW264.7細胞的傳代方法，ATCC推薦使用細胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細胞刮刀進行傳代時，細胞能最大限度被收集起來，但會對細胞造成機械性損傷、影響細胞形態及貼壁時間等。采用胰酶消化時，由于RAW264.7細胞貼壁較牢，消化時間就較長。但消化時間點不易把握，易消化過度，對細胞生長造成抑制。

因此，推薦使用彎嘴吸管吹打進行傳代。具體做法是，當細胞達到傳代密度時，先棄去培養基，用預冷的PBS洗滌兩次，用彎嘴吸管吸取培養基，均勻、稍用力吹打瓶底，即可將細胞吹打下來（吹不下來的就不要了），離心后重懸即可分瓶培養。2 h后可見細胞貼壁。

由于RAW264.7細胞生長速度較快，一般1-2d換液1次，密度長至60%-70%左右即可傳代，傳代比例可為1:3-1:6。若傳代間隔太久，細胞生長密度過大，細胞也容易發生分化，出現長偽足的多形細胞。

四、RAW264.7細胞的凍存及復蘇

RAW264.7細胞的凍存及復蘇方法與一般貼壁細胞并無較大差別。但由于RAW264.7細胞對外界刺激較敏感，對營養條件要求較高，許多人建議降低DMSO的濃度，增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養基（小鼠單核巨噬細胞白血病細胞的培養及其在誘導破骨細胞中的應用，許丹等，中國骨質疏松雜志，2016, 10, 22, 10）。

五、RAW264.7細胞的轉染

（一）以往轉染數據

RAW264.7細胞是一種巨噬細胞，有很強的貼壁性和偽足產生性，其轉染較難，一般采用電轉或慢病毒穩轉的方法。有研究者對RAW264.7細胞用幾種不同的轉染方法進行處理，對轉染效率進行比較。結果發現，脂質體轉染（Lipofectamine 2000, Invitrogen）效率很低，僅為12.17±1.53%，慢病毒轉染效率是最高，可達34.75 ± 5.30%，羅氏轉染（X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent, Roche）和電穿孔轉染效率分別為16.52 ± 3.86%和15.73 ± 3.29%（巨噬細胞RAW264.7不同轉染方法的比較，李亞等，生物技術，2014, 24, 2）。