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            深圳市安培生物科技有限公司
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            血清系列
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            細胞因子分子
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            蛋白研究系列
            修飾檢測試劑盒

            單鏈 cDNA 的合成

            時間:2023/4/21閱讀:1241
            分享:

            材料與儀器

            步驟

            一、材料

            1. 緩沖液、溶液和試劑

            去除 RNA 酶的雙蒸水

            10XRT-PCR 緩沖液(去除 RNA 酶的雙蒸水,100 mmol/LTris-HCl、pH8.3,500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)

            2. 酶和酶緩沖液

            MMLV 逆轉錄酶(100~200U/ul)

            SUPERaseINRNA 酶抑制劑(20U/ul;Ambion)

            3. 核酸和寡核苷酸

            dNTP 混合物(10 mmol/L,包含所有四種 dNTP)

            隨機引物(5umol/L)

            總 RNA(達到 2.5ug)

            4. 實驗器材

            薄壁的 PCR 管

            二、方法

            1. 在冰上加 2ul50umol/L 的隨機引物到薄壁的 PCR 管中(一個反應一管)。

            2. 加入 2.5ug 的總 RNA。

            3. 加入 4ul 的 10 mmol/LdNTP 混合物。

            4. 添加去除 RNA 酶的雙蒸水(RNaSe-freeH20),使體積達到 16ul。

            5.70°C 加熱 10min, 變性二級結構,然后立即放在冰上。

            6. 加 2ul 的 10XRT-PCR 緩沖液。

            7. 加1ul 的 20U/ulSUPERaselN。

            8. 加1ul 的 100~200U/ulMMLV 逆轉錄酶。

            9.42°C 溫浴 1h。

            10.95°C 加熱10min, 滅活逆轉錄酶。

            11. 繼續擴增步驟或停止反應,-2°C 儲存。


            深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、壹流的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業??偛吭O在廣東,服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,旨在為生命科學的發展提供壹流的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線,在各個領域內向用戶提供世界前沿水平和質量穩定的產品,安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等優質客戶提供優質的產品、技術支持與服務。


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